hCG对调节性T细胞的影响及其在妊娠免疫耐受中的作用

发布时间：2019-01-01 13:10

【摘要】：研究背景妊娠是由精卵着床到胎儿分娩的全过程,前期受精卵做为同种异体抗原成分刺激母体胎盘乃至全部机体发生免疫应答。早期,母体产生免疫耐受以保证胎儿的正常发育,该过程的建立涉及机体多种免疫细胞和免疫分子的应答反应,需要各反应间相互协调、相互平衡。整个妊娠期免疫耐受的建立机制目前尚不完全清楚。国内外的研究大多聚集在胎盘作用,如局部固有免疫作用和适应性免疫作用。CD4+T细胞是机体发挥适应性免疫应答的重要细胞,研究者发现有一群新的T细胞,它可以通过产生负性细胞因子白介素-10(interleukin-10,IL-10)发挥免疫调节作用。IL-10可以调节辅助性T细胞1(Th1)、Th2和Th17间的平衡。本课题组成员前期研究显示受孕妇女血浆IL-10含量明显增高,且在妊娠晚期下降,结合妊娠期人绒毛膜促性腺激素hCG升高,我们进一步分析hCG与IL-10的相关性,分析调节性T细胞比例变化是否受到孕期类固醇激素的影响,并在体外条件下验证hCG对调节性T细胞分化的影响。本研究一方面有助于了解妊娠免疫耐受形成的机制,另一方面可为妊娠期免疫耐受不良引起的流产、胎儿发育不良等疾病提供理论依据。同时研究IL-10与免疫耐受的关系,也为诱导免疫耐受维持新移植器官生存等提供重要的免疫靶点。研究目的本实验旨在分析不同妊娠期外周血hCG、IL-10的含量变化,并分析两者相关性,在体外条件下验证hCG促进调节性T细胞分化的作用,阐述妊娠免疫耐受形成的机制,另一方面可为妊娠期免疫耐受不良引起的流产、胎儿发育不良等疾病提供理论依据。同时研究IL-10与免疫耐受的关系,也为诱导免疫耐受维持新移植器官生存等提供重要的免疫靶点。研究方法1.研究对象:按照人卫教材《妇产科学》标准,选择本医院妇科或产科受孕妇女,实验组纳入妊娠早、中、晚三期对象,对照组为健康未妊娠妇女。2.标本采集与前处理:采用肝素钠抗凝管抽取实验组和对照组妇女外周静脉血10ml,离心取上清冻存,采用梯度密度离心法分离单个核细胞,以备后续实验使用。3.利用西门子2000生化仪,通过化学发光法检测血浆标本hCG含量。4.IL-10的检测:采用人IL-10 ELISA检测试剂盒检测不同妊娠期血浆IL-10含量。在有或无hCG条件下,采用佛波酯(PMA)刺激健康人PBMC,检测培养上清IL-10含量。5.PBMC IL-10 mRNA检测:在有或无hCG条件下,采用PMA刺激健康人PBMC,提取刺激后细胞RNA,将其逆转录为cDNA,然后采用RT-PCR检测IL-10 m RNA的相对表达量。6.CD4+CD25+IL-10+Treg细胞比例检测:在有或无hCG条件下,采用PMA刺激健康人PBMC,流式细胞技术分析刺激后细胞中Treg细胞百分比。研究结果1.化学发光法检测结果显示hCG在妊娠早期、中期和晚期含量分别为(51304.3±27601.1)IU/L、(14310.2±17719.3)IU/L和(13257.4±7031.5)IU/L,均高于未孕妇女外周血血浆hCG的含量(2.8±3.3)IU/L,统计学有显著差异。2.早、中期妊娠期妇女外周血血浆IL-10含量分别为(326.8±117.0)pg/ml和(213.8±99.1)pg/ml,明显高于未受孕妇女(91.3±11.1)pg/ml,且均有P0.001。晚期妊娠组妇女外周血血浆IL-10的含量为(150.9±18.8)pg/ml,略高于未妊娠组(P0.05)。IL-10与hCG呈现高度正相关性(R2=0.719,P0.001)。3.hCG刺激健康未孕妇女外周血PBMC分泌IL-10:有hCG存在的情况下,培养上清IL-10含量为(24.2±9.4)pg/ml,PBMC中IL-10 mRNA相对表达量为(2522.3±784.3);无hCG时,培养上清IL-10含量为(13.8±3.4)pg/ml,PBMC中IL-10 mRNA相对表达量为(1359.8±311.0),前者显著高于后者且有统计学差异。4.hCG刺激CD4+CD25+IL-10+Treg增殖:有hCG存在时,CD4+CD25+IL-10+Treg比例为(7.8±2.1)%,无hCG存在时,CD4+CD25+IL-10+Treg比例为(4.5±1.8)%,前者明显高于后者且有统计学差异。结论1.妊娠期外周血血浆IL-10含量和hCG含量呈高度正相关,均在早期增高达到峰值,而后开始下降,至妊娠末期接近未受孕妇女。2.体外条件下,hCG可刺激CD4+CD25+IL-10+Treg细胞增殖,后者分泌更多IL-10进而参与母体妊娠期免疫耐受的过程,为胎儿正常生长发育提供必要条件。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R714

【参考文献】