MicroRNA-145在耐药的上皮性卵巢癌中表达水平的相关研究

发布时间：2019-02-15 13:45

【摘要】：目的：卵巢癌（Ovary cancer, OC）是常见的女性生殖道恶性肿瘤之一，发病率占所有女性肿瘤的第六位。上皮性卵巢癌（epithilial ovary cancer,EOC）来源于卵巢表层上皮，是最常见的卵巢癌类型，每年约有12万患者死于该肿瘤，居所有妇科肿瘤病死率第一位。上皮性卵巢癌的高死亡率主要是因为其缺乏早期的特异性症状和体征，超过70%的初诊卵巢癌患者分期已为Ⅲ期或Ⅳ期，失去了最佳治疗时机。如果卵巢癌在肿瘤仍局限在卵巢内的早期被发现，并采取积极治疗，患者的5年生存率将大于90%。卵巢癌目前首选的治疗方案为减瘤术联合铂类为主的化疗。尽管诊断和化疗技术在不断发展，但至今晚期患者的5年生存率仅为30%，且多数患者会复发并产生耐药。那么，何为卵巢癌复发和耐药的根源，何种细胞因子能抑制或促进肿瘤的发生和发展呢？这是学者目前的研究热点，但迄今为止仍未有突破性的进展。 MicroRNAs（miRNAs）是一类长为18~24个核苷酸的内源性非编码的单链RNA分子，广泛存在生物体内，在细胞的增殖、分化、凋亡及个体发育中发挥重要的作用。miRNA不编码任何蛋白，通过降解或抑制两种方式，负性调控靶基因的表达，进而调控人类约30%的基因表达。研究已证实miRNAs与肿瘤发生发展显著相关，主要为肿瘤的增殖、凋亡、侵袭、转移及其耐药等。miRNAs突变、缺失和表达水平的异常是所有肿瘤共有的特征。在众多miRNAs中，有些miRNAs具有“癌基因”的作用，，有些miRNAs却具有“抑癌基因”的作用，哪些发挥“抑癌基因”作用的miRNAs能作用于靶基因，抑制肿瘤的发生发展，进而逆转肿瘤的复发和耐药？MicroRNA145(miR-145)是microRNA家族中的一个亚型，研究证实miR-145为肿瘤抑制因子，可以抑制肿瘤干细胞的多能性进而影响肿瘤细胞的生长和转移侵袭，并认为其低表达会减弱对其靶基因的调控作用进而促进肿瘤的发生，故它的表达缺失与肿瘤细胞的恶性行为有关。已有发现其与肿瘤的耐药性密切相关，如miR-145与肺癌的耐药存在相关性，但是miR-145与卵巢癌的耐药性的相关性却未见报道。本研究旨在通过检测上皮性卵巢癌细胞株、耐药细胞株及其移植瘤中miR-145的表达，探讨miR-145与卵巢癌耐药是否存在相关性，为后期进一步研究转染miR-145后能否抑制卵巢癌的耐药提供实验基础，进而期待miR-145能够成为一种肿瘤抑制剂，从而成为在恶性肿瘤的治疗中的一种新的抗肿瘤途径。方法： 1细胞培养：人浆液性囊腺卵巢癌细胞系SKOV3和SKOV3/DDP培养于含有10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中，静置于37℃，5%CO2，饱和湿度培养箱中。 2构建裸鼠移植瘤模型：常规体外培养非耐药人卵巢浆液性囊腺癌细胞株SKOV3，耐药细胞株SKOV3/DDP,待细胞覆盖培养瓶底80%-90%时收集细胞，对细胞进行计数，制成5×107个/ml单细胞悬液，分别以每只裸鼠0.2ml（即1×107个细胞）于无菌条件下接种于裸鼠背侧近后肢处的皮下。测量移植瘤的大小，在最长径达0.5-0.8cm（10天左右）时将肿瘤取出，立即放入液氮罐中，备用。 3RT-PCR检测：取未经试剂固定、保存于-80℃冰箱的移植瘤组织，用RT-PCR技术检测上皮性卵巢癌细胞株、耐药细胞株及其移植瘤中miR-145的表达水平，经公式2－ΔΔCtmiR-145计算得到各个标本中miR-145相对表达量。 4统计学方法：所得数据使用SPSS13.0统计软件，采用Student’s t检验分析miR-145在普通癌细胞与耐药癌细胞间、移植瘤中普通癌细胞与耐药癌细胞间及体外细胞与移植瘤中的表达差异，结果以x±s表示，其中P0.05被认为有统计学意义。结果： 1miR-145在SKOV3/DDP细胞中表达低于SKOV3细胞（0.45±0.07vs1.09±0.16P0.05），差异有统计学意义。 2miR-145在SKOV3/DDP裸鼠移植瘤中表达低于SKOV3裸鼠移植瘤（0.41±0.06vs1.13±0.34P0.05），差异有统计学意义。 3miR-145在体外培养的SKOV3细胞中表达低于SKOV3裸鼠移植瘤（1.09±0.16vs2.89±0.89P0.05），差异有统计学意义。结论：1无论在体内还是体外培养的卵巢癌细胞中，miR-145在耐药的卵巢癌细胞中表达量均较非耐药卵巢癌细胞低，说明miR-145与肿瘤的耐药存在相关性，其表达水平的降低可能减弱对其靶基因的作用，从而导致上皮性卵巢癌的耐药。2miR-145在体外培养的SKOV3细胞中表达低于SKOV3裸鼠移植瘤中表达，这与胚胎干细胞（ESCs）及其分化后细胞的表达变化相似。
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【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R737.31

【参考文献】