低氧诱导肾上腺髓质素对卵巢癌细胞及在体肿瘤的生长促进作用

发布时间：2019-02-19 13:57

【摘要】：目的观察低氧情况下肾上腺髓质素(ADM)对卵巢癌细胞及在体肿瘤的生长促进作用。方法三种卵巢癌细胞系A2780、SKOV3、HO-8910于低氧环境中培养6~24h,采用RT-PCR分析ADM、低氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA表达改变。通过质粒转染获得稳定表达ADM-shRNA的HO-8910细胞,流式细胞术检测ADM表达沉默后卵巢癌细胞的细胞凋亡比例。建立卵巢癌细胞裸鼠荷瘤模型,各组裸鼠每天腹腔内注射5mg/kg的顺铂或皮下瘤内注射10μg/kg的ADM-shRNA,观察肿瘤体积变化并采用Western blot检测ADM蛋白表达。结果 HO-8910细胞24h低氧使ADM mRNA表达上升4.13倍(P0.000 1),VEGF、HIF-1α的mRNA表达则比对照组升高3.46(P0.01)和3.91倍(P0.000 1)。转染72h后,shADM组细胞ADM蛋白表达量比对照组降低48.2%(P0.05),mRNA比对照组降低26.9%(P0.000 1)。shADM组凋亡细胞比例显著高于正常组(shADM组:42.65%;正常组:8.4%;二者相比P0.01)。顺铂+shADM组的抑瘤率为71.39%,显著高于顺铂+PBS组的39.21%(P0.001)或者盐水+shADM组的49.45%(P0.05)。结论低氧环境可诱导卵巢癌细胞ADM表达增加,激活VEGF和HIF-1相关信号通路,继而促进卵巢癌细胞的生长存活。ADM基因沉默能显著促进卵巢癌细胞凋亡并加强顺铂对裸鼠在体瘤的抑瘤作用,因此可能成为卵巢癌基因治疗的潜在的靶点。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of adrenomedullin (ADM) on the growth of ovarian cancer cells and tumor in vivo. Methods three ovarian cancer cell lines A2780 SKOV3HO-8910 were cultured in hypoxic environment for 6h for 24 hours. ADM, hypoxia inducible factor 1 伪 (HIF-1 伪) and mRNA expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) were detected by RT-PCR. HO-8910 cells expressing ADM-shRNA stably were obtained by plasmid transfection. Apoptosis of ovarian cancer cells after ADM expression silencing was detected by flow cytometry. A tumor bearing model of ovarian cancer cells was established in nude mice. Cisplatin (5mg/kg) or ADM-shRNA, (10 渭 g/kg) were injected intraperitoneally to observe the tumor volume and the expression of ADM protein was detected by Western blot in each group. Results the expression of ADM mRNA increased 4.13 times (P0.0001) in HO-8910 cells at 24h hypoxia, and the mRNA expression of VEGF,HIF-1 伪 increased 3.46 (P0.01) and 3.91 times (P0.0001) compared with the control group. After 72 hours of transfection, the expression of ADM protein in shADM group was 48.2% lower than that in control group (P0.05), mRNA was 26.9% lower than that in control group) (P0.000 1). ShADM group was significantly higher than normal group (shADM group: 42.65%). Normal group: 8.4%, compared with P0.01). The inhibitory rate of cisplatin shADM group was 71.39, which was significantly higher than that of cisplatin PBS group (39.21%) or saline shADM group (49.45%) (P0.05). Conclusion hypoxia can induce increased ADM expression and activate VEGF and HIF-1 related signaling pathways in ovarian cancer cells. ADM gene silencing can significantly promote apoptosis of ovarian cancer cells and enhance the inhibitory effect of cisplatin on in vivo tumor of nude mice, so it may become a potential target of gene therapy for ovarian cancer.
【作者单位】： 温州医科大学附属第二医院妇产科;温州市中西结合医院妇产科;
【基金】：浙江省重点科技创新团队项目(No.2012162)~~
【分类号】：R737.31

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本文编号：2426565