p300介导组蛋白乙酰化修饰下调PPAR-γ致妊娠期糖尿病小鼠子代心肌细胞糖脂代谢紊乱

发布时间：2019-07-26 14:33

【摘要】：目的:阐明妊娠期糖尿病(GDM)对子代心肌细胞糖脂代谢的影响,并探讨其可能的调控机制。方法:雌性昆明小鼠于妊娠中期给予腹腔注射链脲佐菌素(30 mg/kg)建立GDM模型,另设对照(control)组。分娩后F1代饲养至8周,测定随机血糖和空腹血脂等相关指标。利用CO2窒息处死F1代实验小鼠,剖开胸腔后分离心脏组织,用于后续实验。q PCR检测p300及p300/CBP相关因子(PCAF)的mRNA表达水平,q PCR及Western blot检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、葡萄糖转运蛋白4(GLUT-4)及中链酰基辅酶A脱氧酶(MCAD)的mRNA和蛋白表达水平,染色质免疫共沉淀(Ch IP)结合q PCR检测p300与PPAR-γ启动子结合水平及PPAR-γ启动子区域组蛋白H3的乙酰化水平。结果:F1代小鼠血糖和总胆固醇轻度升高(P0.05),甘油三酯、高密度及低密度脂蛋白无明显改变;心肌组织中p300、PPAR-γ、GLUT-4及MCAD表达明显降低(P0.05),PCAF的表达两组间差异无统计学显著性;p300与PPAR-γ启动子结合水平和PPAR-γ启动子区域组蛋白H3的乙酰化水平均明显下降(P0.05)。结论:GDM子代小鼠中p300通过介导组蛋白乙酰化修饰而下调PPAR-γ表达,可能引起心肌细胞糖脂代谢紊乱。
【图文】：

至200～1000bp之间。加入ChIP级抗p300及抗乙酰化H3抗体4℃摇床过夜沉淀DNA，65℃逆转交联8～10h，纯化并回收DNA。用核酸蛋白测定仪测定A260/A280比值，以确定ChIP后DNA的纯度和浓度，于－20℃保存。选取PPAＲ-γ基因外显子5＇端前1000bp序列，针对该序列设计特异性引物。引物用PrimerPremier5.0软件设计，由宝生物公司合成。PPAＲ-γ的上游引物序列为5＇-TCTTCCACTTCCACACGTACCAA-3＇，下游引物序列为5＇-CAGAGGGAGTTGGGAGACGTAG-3＇，产物大小为158bp。所得数据用Bio-ＲadCFX96荧光定量PCＲ仪自带基于Pfaffl原理的相对定量数据分析软件分析。4统计学处理采用SPSS23.0进行统计学分析。所有数据用均数±标准差(mean±SD)表示，组间比较应用独立样品t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。结果1子代小鼠随机血糖及空腹血脂水平GDM组子代小鼠生后8周随机血糖及空腹总胆固醇均较对照组有升高(P＜0.05)，而甘油三酯、高密度脂蛋白及低密度脂蛋白在2组间的差异无统计学显著性，见图1。2心肌组织p300、PCAF、PPAＲ-γ、GLUT-4及MCADmＲNA表达水平的检测Figure1．Bloodglucose(A)andbloodlipid(B)levelsinGDMgroupandcontrolgroup．Mean±SD．n=5．*P＜0.05vscontrolgroup．图1对照组与GDM组血糖及血脂水平的比较GDM组F1代小鼠心肌组织中p300、PPAＲ-γ、GLUT-4及MCAD的mＲNA均较正常组降低(P＜0.05)，而PCAF的mＲNA表达在2组中的差异无统计学显著性，见图2。Figure2．ThemＲNAlevelsofp300(A)，PCAF(B)，PPAＲ-γ(C)，GLUT-4(D)andMCAD(E)incontrolgroupandGDMgroup．Mean±SD．n=5．*P＜0.05vscontrolgroup．图2GDM组与对照组各基因mＲNA相对表达量的比较·2224·

至200～1000bp之间。加入ChIP级抗p300及抗乙酰化H3抗体4℃摇床过夜沉淀DNA，65℃逆转交联8～10h，纯化并回收DNA。用核酸蛋白测定仪测定A260/A280比值，以确定ChIP后DNA的纯度和浓度，于－20℃保存。选取PPAＲ-γ基因外显子5＇端前1000bp序列，针对该序列设计特异性引物。引物用PrimerPremier5.0软件设计，由宝生物公司合成。PPAＲ-γ的上游引物序列为5＇-TCTTCCACTTCCACACGTACCAA-3＇，，下游引物序列为5＇-CAGAGGGAGTTGGGAGACGTAG-3＇，产物大小为158bp。所得数据用Bio-ＲadCFX96荧光定量PCＲ仪自带基于Pfaffl原理的相对定量数据分析软件分析。4统计学处理采用SPSS23.0进行统计学分析。所有数据用均数±标准差(mean±SD)表示，组间比较应用独立样品t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。结果1子代小鼠随机血糖及空腹血脂水平GDM组子代小鼠生后8周随机血糖及空腹总胆固醇均较对照组有升高(P＜0.05)，而甘油三酯、高密度脂蛋白及低密度脂蛋白在2组间的差异无统计学显著性，见图1。2心肌组织p300、PCAF、PPAＲ-γ、GLUT-4及MCADmＲNA表达水平的检测Figure1．Bloodglucose(A)andbloodlipid(B)levelsinGDMgroupandcontrolgroup．Mean±SD．n=5．*P＜0.05vscontrolgroup．图1对照组与GDM组血糖及血脂水平的比较GDM组F1代小鼠心肌组织中p300、PPAＲ-γ、GLUT-4及MCAD的mＲNA均较正常组降低(P＜0.05)，而PCAF的mＲNA表达在2组中的差异无统计学显著性，见图2。Figure2．ThemＲNAlevelsofp300(A)，PCAF(B)，PPAＲ-γ(C)，GLUT-4(D)andMCAD(E)incontrolgroupandGDMgroup．Mean±SD．n=5．*P＜0.05vscontrolgroup．图2GDM组与对照组各基因mＲNA相对表达量的比较·2224·
【作者单位】： 成都市第一人民医院儿科;
【分类号】：R714.256

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本文编号：2519614