抑制miR-18a的水平增加HTR8人正常滋养细胞雌激素受体1的表达并促进细胞凋亡
【图文】：
混匀，避光室温反应15min;300目滤膜滤去细胞团块后，流式细胞术检测。1．2．5统计学分析应用SPSS19．0软件。计量资料以x±s表示，两组组间采用独立样本t检验，多组组间采用单因素方差分析，P＜0．05为差异具有统计学意义。细胞增殖周期检测结果采用MulticycleforWindows32-bit统计软件进行分析;细胞凋亡检测结果采用Expo32ADCAnalysis系统进行统计分析。2结果2．1HTＲ8细胞转染效率使用荧光显微镜观察FAM标记的阴性对照来监测转染效率，细胞核内有绿色荧光代表转染成功(图1)，HTＲ8细胞的转染效率达80%以上。图1HTＲ8细胞转染效率(荧光显微镜，×200)2．2在HTＲ8细胞调控miＲ-18a的表达水平采用相应miＲNA转染后，对照组、miＲ-18a过表达组、miＲ-18a抑制组，HTＲ8细胞的miＲ-18a水平分别为0．407±0．019、0．880±0．060、0．160±0．014(图2)。与对照组相比，相应处理可分别上调或下调HTＲ8细胞miＲ-18a水平，差异有统计学意义(P＜0．05，图2)。A:反转录PCＲ检测HTＲ8细胞的miＲ-18a水平;B:HTＲ8细胞的miＲ-18a水平的半定量分析．1:miＲ-18a过表达组;2:阴性对照组;3:miＲ-18a抑制组．aP＜0．05vs2．图2反转录PCＲ检测HTＲ8细胞的miＲ-18a水平1104细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmunol)2017，33(8)
50±0．009。与对照组相比，，miＲ-18a过表达组EＲ1蛋白水平降低、miＲ-18a抑制组EＲ1蛋白水平增加，差异有统计学意义(P＜0．05，图3)。2．4下调miＲ-18a后增加HTＲ8细胞凋亡流式细胞术检测转染miＲ-18a后各组间HTＲ8细胞周期变化。结果显示miＲ-18a过表达组、miＲ-18a过表达组FAM对照、miＲ-18a抑制物组、miＲ-18a抑制物FAM对照组、阴性对照组G2/M+S期细胞比例依次为(66．4±1．5)%、(62．2±3．0)%、(65．7±2．2)%、(64．2±3．1)%、(65．2±2．4)%，G2/M+S期细胞比例未见明显变化，差异无统计学意义(P＞0．05，图4)。与对照组相比，抑制miＲ-18a表达后，HTＲ8细胞凋亡明显增加，差异有统计学意义(P＜0．05，图4)。A:反转录PCＲ检测HTＲ8细胞EＲ1mＲNA水平;B:HTＲ8细胞EＲ1mＲNA水平的半定量分析;C:Westernblot法检测HTＲ8细胞EＲ1蛋白水平;B:HTＲ8细胞EＲ1蛋白水平的半定量分析．1:miＲ-18a过表达组;2:阴性对照组;3:miＲ-18a抑制组．aP＜0．05vs2．图3HTＲ8细胞EＲ1水平A:流式细胞术检测HTＲ8细胞周期;B:HTＲ8细胞周期的半定量分析;C:流式细胞术检测HTＲ8细胞凋亡情况;D:HTＲ8细胞凋亡的半定量分析．1:miＲ-18a过表达组;2:miＲ-18a过表达组FAM对照;3:miＲ-18a抑制物组;4:miＲ-18a抑制物FAM对照组;5:阴性对照组．aP＜0．05vs5．图4流式细胞术检测转染后HTＲ8细胞周期和细胞凋亡3讨论PE具有妊娠期特发、母儿并发症严重以及病死率较高等特点［12］，属于胎盘源性疾病目前已得到较一致认可［13］。多因素参与的贯穿于胚胎着床期-胎盘形成期-晚孕期的阶段性机体生理病理变化最终导致PE的发生［14］。其中滋养细胞增殖能力下降、细胞凋亡增加，致使细胞浸润能力不足，子宫螺旋动脉重塑障碍及胎盘浅着床，是PE发
【作者单位】： 西安医学院第一附属医院;第四军医大学唐都医院生殖医学中心;
【基金】：陕西省科技计划项目(S2016YFSF0367)
【分类号】：R714.244
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