EPCAM、MUC16免疫磁珠制备及循环肿瘤细胞检测

发布时间：2019-08-12 19:36

【摘要】：目的检测EPCAM、MUC16两种抗原在上皮性卵巢癌循环肿瘤细胞中表达的相关性。方法分别用羧基磁珠制备EPCAM、MUC16两种免疫磁珠,分3组:EPCAM免疫磁珠检测组、MUC16免疫磁珠检测组、2种磁珠均等混合检测组。对来源于同一患者的等体积外周血样本进行循环肿瘤细胞检测,HE染色后鉴定检测值。结果 EPCAM免疫磁珠、MUC16免疫磁珠、EPCAM+MUC16免疫磁珠对同体积、同来源样本检测值分别为22±11、14±6、28±12个肿瘤细胞(P0.05),说明检测效率有统计学差异。结论 MUC16与EPCAM在上皮性卵巢癌循环肿瘤细胞中独立表达且存在差异,因此增加MUC16这一器官标志物可有效提高上皮性卵巢癌CTCs检出数量。
【图文】：

表达率,细胞系

V3细胞系EPCAM、MUC16表达情况流式分析SKOV3细胞EPCAM、MUC16表达率分别为（99.61±0.19）%、（99.99±0.01）%（图1），免疫荧光结果显示EPCAM、MUC16抗原均匀表达于SKOV3细胞膜上（图2）。IFimagesshowedthatEPCAM(a-c)andMUC16(d-f)antigenswereexpressinguniformlyinSKOV3cells,respectively.图2IF检测SKOV3细胞系EPCAM、MUC16表达（×400）Fig2IFdetectionoftheEPCAMandMUC16expressioninSKOV3cells（×400）EPCAMantigenexpressionwas99.41%andtheMUC16antigenexpressionwas99.99%inSKOV3cellsanalyzedbyFACS.图1FACS检测SKOV3细胞系EPCAM、MUC16表达率Fig1FACSdetectionoftheEPCAMandMUC16expressioninSKOV3cells2.2免疫磁珠EPCAM、MUC16表达情况通过用抗单克隆抗体Fc段的荧光二抗对免疫磁珠进行流式分析，显示EPCAM、MUC16两种抗体与磁珠结合后表达率分别为：（94.17±1.05）%、（97.80±0.60）%（图3），，免疫荧光分析显示磁珠与抗体结合后分散性良好（图4）。2.3免疫磁珠敏感性EPCAM、MUC16单独与共同的检测限值均为每4ml血液中有50个SKOV3细胞，但能稳定检出细胞的界限值为每4ml血液中有100个SKOV3细胞（表1），3组结果无统计学差异（P>0.05）（图5）。2.4免疫磁珠特异性免疫磁珠可与SKOV3细胞碎片或外周血细胞破碎细胞膜如红细胞膜碎片结合，但不与外周血白细胞结合（图6）。在子宫内膜异位症、盆腔炎这2种常见外周血中MUC16值升高的患者中未检出肿瘤细胞（表2）。·519·

细胞系

嗾酥时却螅囝忻庖叽胖?结合。1.13统计学分析所有数据以平均值±标准差表示，采用统计学软件SPSS19.0分析，2组数据比较时采用两样本独立T检验，P<0.05认为有显著差异。数据分析使用GraphPadPrism5软件。2结果2.1SKOV3细胞系EPCAM、MUC16表达情况流式分析SKOV3细胞EPCAM、MUC16表达率分别为（99.61±0.19）%、（99.99±0.01）%（图1），免疫荧光结果显示EPCAM、MUC16抗原均匀表达于SKOV3细胞膜上（图2）。IFimagesshowedthatEPCAM(a-c)andMUC16(d-f)antigenswereexpressinguniformlyinSKOV3cells,respectively.图2IF检测SKOV3细胞系EPCAM、MUC16表达（×400）Fig2IFdetectionoftheEPCAMandMUC16expressioninSKOV3cells（×400）EPCAMantigenexpressionwas99.41%andtheMUC16antigenexpressionwas99.99%inSKOV3cellsanalyzedbyFACS.图1FACS检测SKOV3细胞系EPCAM、MUC16表达率Fig1FACSdetectionoftheEPCAMandMUC16expressioninSKOV3cells2.2免疫磁珠EPCAM、MUC16表达情况通过用抗单克隆抗体Fc段的荧光二抗对免疫磁珠进行流式分析，显示EPCAM、MUC16两种抗体与磁珠结合后表达率分别为：（94.17±1.05）%、（97.80±0.60）%（图3），免疫荧光分析显示磁珠与抗体结合后分散性良好（图4）。2.3免疫磁珠敏感性EPCAM、MUC16单独与共同的检测限值均为每4ml血液中有50个SKOV3细胞，但能稳定检出细胞的界限值为每4ml血液中有100个SKOV3细胞（表1），3组结果无统计学差异（P>0.05）（图5）。2.4免疫磁珠特异性免疫磁珠可与SKOV3细胞碎片或外周血细胞破碎细胞膜如红细胞膜碎片结合，但不与外周血白细胞结合（图6）。在子宫内膜异位症、盆腔炎这2种常见外周血中MUC16值升高的患者中未检出肿瘤细胞（表2）。·519·
【作者单位】：重庆医科大学基础医学院;重庆市肿瘤研究所;
【基金】：国家自然科学基金(81171365)
【分类号】：R737.31

【参考文献】