低氧诱导下HIF-1α与VEGF-A在宫颈腺癌中的表达及其相关性研究

发布时间：2019-09-19 07:39

【摘要】：目的：通过免疫组织化学方法研究缺氧诱导因子1α（HIF-1α）与血管内皮生长因子-A(VEGF-A)在宫颈腺癌组织中的表达及其两者之间的关系；通过二氯化钴（CoCl2）建立人宫颈腺癌Hela细胞体外缺氧模型，观察缺氧诱导作用下人宫颈腺癌Hela细胞的增殖情况及HIF-1α和VEGF-A在基因和蛋白水平上的表达；探讨缺氧作用下HIF-1α与VEGF-A在宫颈腺癌生长、浸润和转移中的作用，以及两者间的关系。方法：1、收集筛选得到满足实验标准的宫颈腺癌腊块组织50例，通过免疫组织化学方法研究HIF-1α与VEGF-A在宫颈腺癌组织中的表达，并进一步分析两者的临床意义和两者间的相互关系；2、通过CoCl2试剂建立细胞体外缺氧模型；3、体外培养人宫颈腺癌Hela细胞，用（50、100、150、200μmol/L）不同浓度的CoCl2作用于Hela细胞不同时间（0、3、6、12、24小时）后， CCK8法检测各组中缺氧对人宫颈腺癌Hela细胞增殖的影响，运用实时荧光定量PCR技术检测150μmol/LCoCl2作用0、3、6、12、24小时后人宫颈腺癌Hela细胞中HIF-1α和VEGF-A在mRNA表达水平上的变化，采用免疫细胞化学技术检测150μmol/LCoCl2作用0、3、6、12、24小时后人宫颈腺癌Hela细胞中HIF-1α和VEGF-A在蛋白表达水平上的改变。结果：1、检测50例宫颈腺癌组织和20例正常宫颈组织后，我们发现HIF-1α在宫颈腺癌中的阳性表达率为58.00%，在正常宫颈石蜡组织块中的阳性表达率为10.00%，二者差异有统计学意义（P0.05)；VEGF-A在宫颈腺癌组织中的阳性表达率为64.00%，在正常宫颈组织的宫颈腺中的阳性表达率为5.00%，二者差异有统计学意义（P0.05)。HIF-1α及VEGF-A在宫颈腺癌组织中的蛋白表达同患者的年龄及病理分级无关（P0.05），而与患者的瘤体大小、淋巴结转移与否以及临床肿瘤分期有关（P0.05)，且HIF-1α与VEGF-A两者呈正相关关系，相关系数为0.629(P0.01)；2、CCK8细胞增殖实验检测结果表明，CoCl2造成的缺氧能有效地抑制人宫颈腺癌Hela细胞的增殖活性，不同浓度CoCl2干预组和不同干预时间组与常氧对照组相比差异均有统计学意义(P0.05)。随着CoCl2浓度的增加细胞增殖抑制率逐渐增加，在CoCl2浓度为150μmol/L时达到最大，而后开始下降，同样，同一CoCl2浓度作用下，各时间组对细胞增殖活性抑制作用也有一个最高峰，12小时时人宫颈腺癌Hela细胞增殖活性与其他时间点相比最低，抑制率最高，而后抑制率逐渐降低；3、荧光定量PCR结果发现，与常氧对照组相比，在CoCl2浓度为150μmol/L作用下的各时间组中的HIF-1α和VEGF-A都有增加，并且HIF-1α的增加在缺氧12小时时达到最大值，而VEGF-A却是一直呈上升趋势。HIF-1α和VEGF-A在mRNA表达水平上的直线相关关系在统计上不成立，相关系数为0.647，P=0.353（P0.05）；4、免疫细胞化学结果表明，与常氧对照组相比较，在150μmol/L CoCl2诱导下，，各时间组的人宫颈腺癌Hela细胞在缺氧环境中HIF-1α和VEGF-A表达量均升高，且HIF-1α蛋白表达量在缺氧12小时达到最大，随之有所减少，而VEGF的蛋白表达量一直呈上升趋势。HIF-1α和VEGF-A在蛋白表达水平上存在正相关关系，相关系数为0.892，P=0.042(P0.05)。结论：1、HIF-1α及VEGF-A蛋白表达水平的高低可能对患者肿瘤浸润和转移有一定预示作用；2、HIF-1α可能是VEGF-A的调控因子之一， HIF-1α可能是通过诱导VEGF-A的蛋白表达水平来增加宫颈腺癌侵袭与转移的机会；3、缺氧能够抑制人宫颈腺癌Hela细胞的增殖，其抑制作用在CoCl2浓度为150μmol/L抑制作用时达到最大；4、HIF-1α可能通过诱导人宫颈腺癌Hela细胞中VEGF-A的蛋白表达，减少缺氧对人宫颈腺癌Hela细胞增殖的抑制作用；5、HIF-1α抑制剂和抗血管生成剂在宫颈腺癌的治疗方面可能具有潜在的基础与临床研究价值，可以对宫颈腺癌新型抗癌药物及辅助化疗药物的种类做一补充。
【图文】：

阴性,宫颈腺癌

图 1A HIF-1α 在正常宫颈腺体中的阴性表达(Envision ×200)Figure 1 A Expression of HIF-1α protein innormal tissues(Envision ×200)图 1 B HIF-1α 在宫颈腺癌中的阳性表达(Envision ×200)Figure 1 B Expression of HIF-1α protein incervical adenocarcinoma (Envision ×200)图 2A VEGF-A 在正常宫颈腺体中的阴性表达(Envision ×200)图 2 B VEGF-A 在宫颈腺癌中的阳性表达(Envision ×200)

宫颈腺癌,阴性

【参考文献】