复发性自然流产（RSA）相关miRNA-27a、瘦素的表达及功能研究

发布时间：2019-09-24 08:05

【摘要】：目的：1.检验miRNA-27a在正常妊娠与复发性自然流产绒毛组织中的差异表达。验证基因芯片检测结果。 2.在HTR-8滋养细胞中过表达与抑制表达miRNA-27a,检测miRNA-27a对瘦素表达的影响,探讨miRNA-27a与瘦素之间的调控关系。 3.研究miRNA-27a对人正常滋养细胞(HTR-8)的凋亡的影响,探讨miRNA-27a在复发性自然流产中的作用,为复发性自然流产的研究提供理论依据。方法：1.应用实时荧光定量RT-PCR (Real-time RT-PCR)方法检测miRNA-27a在15例复发性自然流产患者(实验组)及15例正常妊娠绒毛组织(对照组)中的表达水平。 2.采用miRNA过表达与抑制表达技术,在人滋养细胞系(HTR-8)中过表达与抑制表达miRNA-27a, RT-PCR技术检测在人滋养细胞系中miRNA-27a与瘦素mRNA的表达水平,Western-blot技术检测瘦素蛋白质的表达水平。明确miRNA-27a与瘦素之间在mRNA和蛋白质水平的调控关系。 3.在HTR-8细胞中过表达与抑制表达miRNA-27a,采用流式细胞技术检测HTR-8细胞凋亡的变化。结果：1.对照组与实验组绒毛组织中均有miRNA-27a表达,其表达量分别为0.5094±0.1926和1.2213±0.2455,实验组绒毛组织中miRNA-27a表达高于对照组,P0.001,差异有统计学意义,与文献报道基因芯片检测结果相符。 2.在人滋养细胞系(HTR-8)中,过表达miRNA-27a后,RT-PCR结果显示miRNA-27a的表达增加(P0.05),而Leptin mRNA的表达降低(P0.05),差异有统计学意义；抑制miRNA-27a的表达后, RT-PCR结果显示miRNA-27a的表达降低(P0.05),而Leptin mRNA的表达增加(P0.05),差异有统计学意义；Western-blot检测结果显示,过表达miRNA-27a后,Leptin蛋白质的表达降低(P0.05),抑制miRNA-27a的表达后,Leptin蛋白质的表达增加(P0.05),差异有统计学意义。表明miRNA-27a与Leptin在mRNA及蛋白质水平存在负性调控关系。 3.流式细胞技术检测结果显示,过表达miRNA-27a后,细胞凋亡率增加(P0.05)；抑制miRNA-27a的表达后,细胞凋亡率降低(P0.05),差异有统计学意义。结论：1.在复发性自然流产组绒毛组织中miRNA-27a表达增高,提示miRNA-27a高表达与复发性自然流产的发生有关。 2.实验结果显示瘦素为miRNA-27a的作用靶点,而在mRNA和蛋白质水平miRNA-27a均对瘦素有着明显的负性调控作用。 3.过表达miRNA-27a可以增加HTR-8细胞的凋亡率,因此在复发性自然流产中高表达的miRNA-27a可能通过促进滋养细胞的凋亡从而参与了复发性自然流产的发病过程。
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R714.21

【参考文献】