复发性流产与凝血相关基因和叶酸代谢相关基因的单核甘酸多态性的荟萃分析及关联分析

发布时间：2019-11-18 18:56

【摘要】：研究背景复发性流产(recurrent pregnancy loss, RPL)是一种常见的产科疾病。习惯上将其定义为连续3次或3次以上20孕周以前自然发生的流产,最近,美国生殖医学学会将其定义为连续2次或2次以上自然发生的流产。它是一种病因复杂的疾病,遗传和环境因素都能促进其的发生和发展。血栓形成被认为是RPL的主要病因之一,尤其在妊娠的前半周期。凝血相关基因的多态性被认为是遗传性血栓形成的主要因素,并在妊娠的前或后半周期起作用,导致流产的发生。高同型半胱氨酸血症是很多妊娠相关疾病的独立危险因素。叶酸是同型半胱氨酸代谢过程中的辅助因子,叶酸的缺乏会导致血液中同型半胱氨酸水平的升高。异常的叶酸代谢可能会影响同型半胱氨酸代谢相关的酶的活性,从而导致血液当中同型半胱氨酸浓度的升高,最终导致流产的发生。因此,我们推测叶酸代谢相关基因的多态性也是RPL的危险因素。研究目的荟萃分析通过以往文献研究凝血相关基因及叶酸代谢相关基因的单核苷酸多态性与RPL的相关性,关联分析进一步通过实验研究验证凝血相关基因多态性与中国人群RPL的相关性及叶酸代谢相关基因多态性与中国人群早期RPL的相关性。研究方法查阅PubMed MEDLINE、EMBASE和CNKI数据库鉴定到目前为止符合荟萃分析要求所有的英文和中文文献。通过MI×1.7软件,比较多态性位点eNOS intron 4 VNTR和Asp298Glu (rs1799983),MTHFR C677T (rs1801133)和A1298C(rs1801131)的基因型和等位基因与RPL的相关性。所有的统计分析,双边P值小于0.05被认为有统计学意义。病例-对照研究病例组包含了104例至少发生了连续2次20孕周以前流产的病人,对照组包含了184例与病例组种族、年龄匹配,具有正常的月经周期,至少有一次正常自然妊娠,没有流产及其他妊娠并发症史的健康人。从外周血细胞中提取基因组DNA, 对6个凝血相关基因多态性位点SERPINC1 G786A (rs2227589), THBD C1418T (rs1042579), TFPI T-33C (rs8176592), Factor V G1628A (rs6020), Factor Ⅱ G19911A (rs3136516), ANXA5 C76T (rs113588187)和3个叶酸代谢相关基因多态性位点MTRR A66G (rs1801394), SLC19A1 G80A (rs1051266)和C696T (rs12659)通过Sequenom公司的MassARRAY IPLEX检测平台进行检测。其他的2个叶酸代谢相关基因的多态性位点MTHFR C677T (rs1801133)和A 1298C(rs1801131)通过聚合酶链反应后经直接测序法进行检测。通过SPSS13.0版本,用卡方检验比较每个多态性位点的基因型及等位基因频率在病例组和对照组中的差异。并对P值进行Bonferroni校正。研究结果一：荟萃分析1.结果显示eNOS rs1799983的多态性与RPL相关(OR:1.67,95% CI:1.36-2.04, P0.001), eNOS intron 4 VNTR的多态性与RPL不存在相关性。分层分析显示eNOS rs1799983的多态性与RPL的相关性仅存在于东亚人中(OR=1.88 (1.52-2.33), P0.001),在高加索人中并不存在此相关性。2. MTHFR rs1801133的多态性与RPL相关(OR:1.34,95% CI:1.13-1.58; P0.0001).经分析未发现MTHFR rs1801131的多态性与RPL之间的相关性。分层分析后仅在东亚人中观察到了MTHFR rs1801133的多态性与RPL相关性(OR=2.11(1.40-3.19),P0.001),在高加索人中未发现相关性。二:病例-对照研究1. THBD rs1042579的等位基因频率在病例组和对照组中存在显著性差异(OR=1.58,95%CI:1.05-2.39, P=0.027)。ESEfinder预测,发现rs1042579影响THBDmRNA的剪接过程,进而影响蛋白的表达。2.其他的5个凝血相关基因多态性位点SERPINC1 rs2227589, TFPI rs8176592, Factor V rs6020, Factor Ⅱrs3136516, ANXA5 rs113588187的基因型和等位基因的频率在病例组和对照组中均无差异。3. MTHFR rs1801131多态性位点的基因型及等位基因的频率在病例组和对照组有明显的差异(AC/AA, AOR=2.58,95%CI:1.40-4.74, P=0.002; AC+CC/AA, AOR=2.53, 95%CI:1.40-4.57 P=0.002; C/A, OR=2.13,95%CI:1.27-3.57, P=0.004)。其他4个叶酸代谢相关基因的多态性位点的等位基因频率在病例组和对照组中相似(MTHFR rs1801133 (T/C, P=0.246), SLC19A1 rs1051266 (A/G,P=0.165)和rs12659 (T/C, P=0.158), MTRR rs1801394 (G/A, P=0.241)。4.在MTHFR rs1801133-rs1801131组成的四个单倍型中,单倍型rs1801133C-rs1801131C与早期RPL相关。SLC19A1 rs1051266-rs12659组成的单倍型与早期RPL不相关。单倍型MTHFR rs1801133C-rs1801131A和SLC19A1 rs1051266G-rs12659C在病例组中的频率低于在对照组中的频率,但是P值大于0.05(P=0.093和P=0.084)。结论荟萃分析结果显示eNOS rs1799983和MTHFR rs1801133与RPL相关性仅存在于东亚人中,在高加索人中不存在。病例-对照研究发现THBD rs1042579与RPL相关；MTHFR rs1801131与早期RPL相关。单倍型MTHFR rs1801133C-rs1801131C是早期RPL的危险因素；单倍型rs1801133C-rs1801131A和rs1051266G-rs12659C在病例组中的频率低于对照组,可能是早期RPL的保护因素。这些结果需要在较大样本的其他人群中进行重复实验,同时THBD rs1042579对蛋白表达的影响需要相关的实验进行验证。
【图文】：

图１．１邋ＤＮＡ质量检测结果逡逑琼脂糖凝胶电泳结果显示，基因组ＤＮＡ条带清晰，长度大于２０化（见下图）。逡逑图１．２邋ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳结果逡逑３．２各ＳＮＰｓ的平衡检测逡逑分别对凝血相关的６个ＳＮＰ位点的基因型进行统计，，应用ＳＨＥｓｉｓ软件，经逡逑卡方检验分析６个ＳＮＰ位点的分型结果在ＲＰＬ病例组和正常对照姐中是否符合逡逑Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ遗传平衡定律。分析其是否具有总体代表性。经检测盈示各个ＳＮＰ逡逑位点在病例组和对照组中均符爸Ｈ－Ｗ遗传定律，因此样本能代表总体。实验结逡逑果具有可信性。Ｈ－Ｗ检测结果如下：逡逑表１．１：逦凝化相关基因的６个ＳＮＰ的Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅ巧检测结果逡逑ＳＮＰ位点逦ＲＰＬ病例组（Ｐ值）邋对照组（Ｐ值）逡逑ＳＥＲＰＩＮＣ１邋ｒｓ２２邋巧巧邋９逦０．：１９逦０．９１逡逑ＴＨＢＤｒｓｌ０４２５７９逦０．３１逦０．９１逡逑ＴＦＰＩ邋ｒｓ８１７６巧２逦０．９６逦０．巧逡逑Ｆａｃｔｏｒ邋Ｖ邋ｒｓ６０２０逦日．３５逦０．９９逡逑Ｆａｃｔｏｒ凸邋ｒｓ３１３６５１６逦０．２８逦０．０６逡逑ＡＮＸＡ５邋ｒｓｌｌ３５８８１８７逦０７０逦０＾逦逡逑４０逡逑

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【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R714.21

【共引文献】

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本文编号：2562720