下调Twist基因及Bcl-2表达对宫颈癌Caski细胞化疗增敏研究

发布时间：2020-01-26 12:51

【摘要】：目的：本实验通过沉默Twist基因表达，分析宫颈癌Caski细胞中Bcl-2蛋白的表达及化疗敏感性的影响。 方法：通过生物信息学方法分析针对干扰Twist基因表达的载体序列，证实Twist基因干扰序列已经构建成功；利用脂质体lipofectamin2000将重组干扰载体转染至宫颈癌Caski细胞，建立稳定低表达Twist基因的重组细胞系；RT-PCR检测各组细胞系中Twist基因的mRNA表达水平；不同浓度的紫杉醇处理低表达Twist基因的重组细胞系48h后，MTT检测细胞生长抑制率，筛选出最佳抑制浓度；Western blot检测低表达Twist基因的重组细胞系中Bcl-2蛋白的表达情况。 结果： 1.成功构建低表达Twist基因的重组细胞系Caski-Twist-shRNA。 2.四个不同干扰载体转染组中，四组细胞Twist-mRNA表达均下降，转染组2Twist-mRNA表达下降最明显，与其它三组相比，差异有显著性（P0.05），表明转染组2的转染率最高；4个转染组与未转染组或空白载体转染组相比，其Twist-mRNA表达下降，差异有显著性（P0.05）；未转染组和空白载体转染组比较无显著性差异（P0.05）。 3.随着紫杉醇浓度的增加，三组细胞的生长抑制率也相应增加，且转染组细胞的生存率均低于未转染组或空白载体转染组，未转染组、空白载体转染组和实验组的IC50值分别为5.86μM、1.06μM和6.80μM；转染组的IC50值较空白载体转染组或未转染组明显增高（P0.05）。 4. Caski-Twist-shRNA中Bcl-2蛋白表达明显下调，，与未转染组或空白载体转染组比较，差异有显著性意义（P0.05），空白载体转染组与未转染组蛋白表达无明显差异（P0.05）。 结论： 1.Twist基因表达下调，宫颈癌Caski细胞对紫杉醇敏感性增强。 2.Twist基因表达降低，导致Caski细胞对紫杉醇敏感性增加，可能与Bcl-2的下调有关。
【图文】：

Twist-shRNA3:GATCC-GGTACATCGACTTCCTCTA-TTCAAGAGA-TAGAGGAAGTCGATGTACC- TTTTTTTwist-shRNA4:GATCC-CCTCTGCATTCTGATAGAA-TTCAAGAGA-TTCTATCAGAATGCAGAGG-TTTTTT

TCC-CCTCTGCATTCTGATAGAA-TTCAAG-TTTTTT图 1 真核载体及 4 个干扰序列的测序结果质粒通过电泳跑胶能清楚看到各组质粒呈马蹄状
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R737.33

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 赵e

本文编号：2573310