GSTM选择性抑制剂对耐顺铂卵巢癌细胞的增敏作用及机制

发布时间：2020-03-10 20:08

【摘要】：卵巢恶性肿瘤的死亡率在妇科恶性肿瘤中最高，卵巢癌术后治疗最主要的辅助治疗手段是化疗，可用如顺铂、阿霉素等药物，，但用药一段时间后肿瘤就会产生耐药性，导致化疗失败。有研究表明GSTP与肿瘤耐药密切相关，而其他同工酶与耐药性联系报道较少。 EAD是本实验室合成的芳香酰胺类GSTM高选择性潜抑制剂，BPD是针对GSTM和GSTA都有效的低选择性GST潜抑制剂，本文研究了二者对常见卵巢癌耐药细胞的增敏作用及机理。本课题首先对SKOV3、SKOV3/DDP，COC1、COC1/DDP及人体正常细胞LO2和HEK293的GSTM、GSTA的表达进行了检测，发现不同细胞株GSTM、GSTA的表达量及比活具有明显差异，耐药细胞株的GSTM、GSTA表达量及比活明显高于非耐药细胞株和人体正常细胞株。由此我们推测GSTM、GSTA与SKOV3、COC1耐药相关。经测定发现EAD/BPD都具有逆转GSTM和GSTA介导的SKOV3、COC1耐药作用。以下研究探讨了EAD/BPD对SKOV3/DDP、COC1/DDP顺铂耐药性的逆转作用，以及EAD/BPD使SKOV3/DDP、COC1/DDP细胞对DDP增敏的效应。本实验用siRNA分别使SKOV3/DDP、COC1/DDP中的GSTM或GSTA沉默，结果显示SKOV3/DDP、COC1/DDP对顺铂敏感性增加。（1）CCK法检测不同浓度EAD/BPD协同不同浓度DDP对SKOV3/DDP、COC1/DDP的耐药逆转作用，测定逆转率。（2）流式细胞术检测不同处理后细胞凋亡情况。（3）Western-blot检测细胞内Caspase-3、Bcl-xl、bak、bax和Bcl-2的表达水平是否上调或下调。结果表明，一定浓度EAD或BPD分别作用后，SKOV3/DDP和COC1/DDP细胞对DDP敏感性增加，DDP的IC50可降低到不耐药细胞的水平，这种逆转作用随着抑制剂浓度的增大而增强；流式细胞术同样可以证明抑制剂具有逆转作用，同时证明具有明显逆转作用的浓度抑制剂对细胞没有明显毒性；Western-blot检测显示抑制剂与低浓度的DDP协同作用于耐药细胞时，caspase-3及其底物PARP活化，bcl-2家族中促凋亡蛋白表达上调，而抑制凋亡成员表达下调。综上所述，GSTM与GSTA高表达与卵巢癌SKOV3和COC1细胞获得顺铂耐药性有密切关系；EAD/BPD都能特异并有效提高COC1/DDP和SKOV3/DDP细胞株对顺铂的敏感性，提高化疗药物治疗水平，为研究肿瘤药物增敏剂提供参考。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R737.31

【参考文献】