人胎盘来源干细胞及其体外诱导胰岛样细胞对妊娠期糖尿病鼠疗效的研究
发布时间：2020-03-22 00:47
【摘要】：目的本研究将人胎盘来源间充质干细胞(human placenta-derived mesenchymal stem cells,hPDMSCs)在体外诱导为胰岛样细胞(Islet-like cells,ILCs)后,分别将两种细胞植入妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)鼠体内,检测GDM鼠体内血糖、脂联素、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白介素6(IL-6)的水平,研究hPDMSCs及ILCs对妊娠期糖尿病的治疗效果,为将来干细胞治疗妊娠期糖尿病提供理论依据。方法取得健康足月剖宫产产妇的胎盘,从其中提取出间充质干细胞,进行分离、培养及鉴定,将鉴定完毕的间充质干细胞在体外诱导为胰岛样细胞,并将诱导后的胰岛样细胞进行双硫腙(DTZ)染色,以确定胰岛细胞的特异性。选择雌性SD大鼠50只,雄性SD大鼠25只,其中10只雌性大鼠正常饮食喂养,另外40只雌性大鼠高糖高脂肪喂养,4周后,雄性和雌性大鼠按比例1:2交配,40只雌鼠受孕后注射链脲佐菌素(STZ),空腹血糖16.7mmol/L即为GDM鼠造模成功。将10只普通喂养的雌性大鼠定为正常孕鼠组(A组),其余40只GDM鼠随机分为4组,即GDM鼠未千预组(B组)、GDM鼠生理盐水干预组(C组)、GDM鼠人胎盘来源干细胞(未诱导)干预组(D组)、GDM鼠胰岛样细胞干预组(E组),随后对各组进行不同处理。在妊娠第6、12、18日检测各组空腹血糖,并在剖宫产术日(妊娠18日)检测血清脂联素、TNF-α、IL-6。结果1.从胎盘中提取出干细胞进行传代、培养,得到的第三代hPDMSCs,通过流式细胞技术进行鉴定,结果为CD44和CD105呈阳性表达,证实获得的细胞是人胎盘来源间充质干细胞,并可用于随后的研究。2.将hPDMSCs诱导后,随诱导时间延长,细胞形态从梭形变为圆形,并向中央靠拢聚集成团,诱导分化28天后的干细胞通过双硫腙染色变为棕红色,证明诱导后的细胞是胰岛样细胞。3.雌鼠空腹血糖16.7mmol/L则建立GDM鼠模型。实验共分为五组:正常孕鼠组(A组)、GDM鼠未干预组(B组)、GDM鼠生理盐水干预组(C组)、GDM鼠人胎盘来源干细胞(未诱导)干预组(D组)、GDM鼠胰岛样细胞干预组(E组)。妊娠第6、12、18日分别测量所有实验组的空腹血糖,同一时间点4组GDM鼠的血糖水平均比正常孕鼠组(A组)高,差异有统计学意义(P0.05);未干预组(B组)和生理盐水组(C组)之间血糖水平差异无统计学意义(P0.05);与B、C组相比,hPDMSCs组(D组)和ILCs组(E组)的血糖水平有所下降,差异有统计学意义(P0.05);E组在妊娠第12、18日血糖水平均低于D组,差异有统计学意义(P0.05);D组、E组组内比较,妊娠第12日血糖水平较第6日低,差异有统计学意义(P0.05),妊娠第18日和妊娠第12日之间血糖水平差异无统计学意义(P0.05)。与A组相比,B组和C组的脂联素水平降低,TNF-α、IL-6水平升高,差异有统计学意义(P0.05)。B组和C组之间脂联素、TNF-α、IL-6水平差异无统计学意义(P0.05)。D、E组与B、C组比较,脂联素水平上升,TNF-α、IL-6水平降低,差异有统计学意义(P0.05)。D、E组相比较,E组脂联素水平较高,TNF-α、IL-6水平较低,差异有统计学意义(P0.05)。结论1.人胎盘来源干细胞及胰岛样细胞均能够降低GDM鼠血糖,降低TNF-α、IL-6水平,提升脂联素水平,其治疗GDM鼠有效。2.人胎盘来源干细胞和胰岛样细胞比较,胰岛样细胞降低血糖、TNF-α、IL-6及提升脂联素水平更明显,胰岛样细胞治疗GDM鼠的效果优于未诱导的人胎盘来源干细胞。
【图文】：
逡逑（７）加终止液，读数。在完成添加终止液之后，测量光密度（ＯＤ值）。逡逑（８）计算结果。各个所得数值用平均数进行计算，画标准曲线，并根据其计逡逑算出样品的实际浓度。逡逑（六）统计学处理逡逑使用ＳＰＳＳ１９．０软件对实验结果进行统计学分析，所得数据以均数土标准差表逡逑示，Ｐ邋＜邋０．０５为差异有统计学意义。对实验所得的每组数据进行正态性和方差齐性逡逑检验，若数据满足正态分布且方差齐，则各组间比较采用方差分析，两组之间比逡逑较采川ＳＮＫ检验。逡逑实验结果逡逑（ ）ｈＰＤＭＳＣｓ鉴定结果逡逑通过流式细胞技术鉴定第三代ｈＰＤＭＳＣｓ，得到结果：表面抗原ＣＤ４４和ＣＤ１０５逡逑：者均呈卩丨丨性，这Rヅ汤丛醇涑渲剩裕肯赴矶沟呐┐镒阆喾模迹薄ｅ义，
本文编号：2594189
【图文】：
逡逑（７）加终止液，读数。在完成添加终止液之后，测量光密度（ＯＤ值）。逡逑（８）计算结果。各个所得数值用平均数进行计算，画标准曲线，并根据其计逡逑算出样品的实际浓度。逡逑（六）统计学处理逡逑使用ＳＰＳＳ１９．０软件对实验结果进行统计学分析，所得数据以均数土标准差表逡逑示，Ｐ邋＜邋０．０５为差异有统计学意义。对实验所得的每组数据进行正态性和方差齐性逡逑检验，若数据满足正态分布且方差齐，则各组间比较采用方差分析，两组之间比逡逑较采川ＳＮＫ检验。逡逑实验结果逡逑（ ）ｈＰＤＭＳＣｓ鉴定结果逡逑通过流式细胞技术鉴定第三代ｈＰＤＭＳＣｓ，得到结果：表面抗原ＣＤ４４和ＣＤ１０５逡逑：者均呈卩丨丨性，这Rヅ汤丛醇涑渲剩裕肯赴矶沟呐┐镒阆喾模迹薄ｅ义，
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