体外不同糖浓度下顺铂联合二甲双胍对子宫内膜癌治疗效果的评估

发布时间：2020-03-23 19:54

【摘要】：目的:肥胖和高血糖不但与I型子宫内膜癌的发生和发展密切相关,而且与子宫内膜癌的高病死率相关。肥胖伴有糖代谢异常的子宫内膜癌患者的化疗效果差。高糖下子宫内膜癌细胞通过调节AMPK/mTOR/S6信号通路而促进子宫内膜癌细胞的生长和增殖。二甲双胍作用于AMPK靶点而激活AMPK信号通路,从而发挥抗肿瘤的作用。另外,二甲双胍可以提高化疗药物顺铂的抗肿瘤的能力,与单用顺铂相比,二甲双胍联合顺铂具有协同抗肿瘤的效应。因此,在本研究中,我们应用已建立的子宫内膜癌细胞系(HEC-1-B、Ishikawa),探讨体外不同葡萄糖浓度培养条件下应用二甲双胍、顺铂以及二甲双胍与顺铂联合抗肿瘤机制。方法:体外通过不同糖浓度(低糖:5.5mmol/L、高糖:25.5mmol/L)培养子宫内膜癌细胞系HEC-1-B和Ishikawa,分别用不同浓度的二甲双胍、顺铂以及二者联合作用于两种细胞,使用CCK-8法评价不同糖浓度下以上三种药物对子宫内膜癌细胞增殖抑制的影响;使用PI染色法和Annexin V/PI法检测不同糖浓度下二甲双胍、顺铂以及二甲双胍联合顺铂对两种子宫内膜癌细胞周期和凋亡的影响;通过Western蛋白印迹实验检测子宫内膜癌细胞在不同糖浓度环境下,应用以上药物干预,观察AMPK/mTOR/S6信号通路相关蛋白的变化,并检测细胞周期蛋白cyclinD1以及细胞抗凋亡蛋白MCL-1的变化,以明确在高糖环境下应用二甲双胍、顺铂以及二甲双胍联合顺铂对子宫内膜癌细胞生长代谢的干预效果及其机制。结果:不同糖浓度下,二甲双胍、顺铂以及二甲双胍联合顺铂对HEC-1-B和Ishikawa细胞增殖抑制呈剂量依赖式。二甲双胍、顺铂和二者联合分别通过G0/G1期、G2/M期和S期阻滞Ishikawa和HEC-1-B细胞增殖。Western蛋白印迹实验结果显示,随着药物浓度增高,HEC-1-B和Ishikawa细胞cyclinD1、MCL-1、p-S6表达下降,p-AMPK表达增强。另外,在药物浓度相同时,高糖浓度上调p-AMPK以及下调cyclinD1、MCL-1、p-S6能力显著低于低糖。结论:二甲双胍、顺铂以及二甲双胍联合顺铂均抑制子宫内膜癌细胞的增殖抑制,而且二甲双胍与顺铂联合应用可以增加顺铂诱导的AMPK活化,抑制AMPK/mTOR/S6信号通路的表达,并且通过阻滞细胞周期的S期、诱导凋亡增强顺铂的抗肿瘤作用。在高糖浓度时,二甲双胍、顺铂以及二甲双胍联合顺铂对HEC-1-B和Ishikawa细胞的增殖抑制作用低于低糖。通过应用AMPK激动剂二甲双胍降低血糖的同时靶向干预以上信号通路,同时联合化疗药物顺铂产生协同作用,提高化疗疗效,为糖代谢异常的子宫内膜癌患者的个体化治疗提供新的思路。
【图文】：

二甲双胍,顺铂,宫内膜癌

体外不同糖浓度下顺铂联合二甲双胍对子宫内膜癌治疗效果的评估对细胞增殖的抑制作用更显著（P < 0.001）。而且二甲双胍与顺铂的联合应用对细胞的增殖抑制率高于单用顺铂和二甲双胍。以上结果表明二甲双胍可以增加顺铂对子宫内膜癌细胞的增殖抑制作用，而且高糖浓度可以影响顺铂、二甲双胍及顺铂联合甲双胍对子宫内膜癌细胞的敏感性。

二甲双胍,顺铂,糖浓度

21图 2 HG：高糖（High Glucose） LG：低糖（Low Glucose） M：二甲双胍（ Metformin） C：顺铂（Cisplatin）。应用二甲双胍、顺铂以及二甲双胍与顺铂联合作用于子宫内膜癌细胞系 HEC-1-B 和Ishikawa 细胞，使每种药物所处的糖浓度为 25.5 mmol/L 和 5.5mmol/L，培养 48h 后，Annexin V/PI染色法,图 A、B、C 结果显示：①三组药物均以剂量依赖的方式引起子宫内膜癌细胞凋亡（*P < 0.05）；②药物在低糖环境中诱导子宫内膜癌细胞凋亡的作用显著增加（*P < 0.05）。图 D、E、F 为 western blot结果：①糖浓度相同时，随着药物浓度增高，，MCL-1 表达降低。②药物浓度相同时，高糖可以增加MCL-1 的表达。β-actin 作为内参。
【学位授予单位】：济南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R737.33

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