虎杖苷对多囊卵巢综合征的治疗作用及其机制研究

发布时间：2020-03-29 23:55

【摘要】：目的:本文旨在通过研究虎杖苷(Polydatin)在改善多囊卵巢综合征(PCOS)小鼠代谢综合征及卵泡发育方面的作用,探究PCOS患者代谢综合征的发生、进展的根源及其分子机制,初步探讨卵泡膜细胞中雄激素合成的调节机制,从源头为多囊卵巢综合征的治疗及预防提供新的思路,并且为临床体外受精-胚胎移植以及卵胞浆内单精子注射等辅助生殖治疗手段中获得优质卵子和胚胎提供新的线索。方法:首先,我们通过脱氢表雄酮(DHEA)诱导建立了PCOS小鼠模型,建模结束后治疗组小鼠给予不同剂量梯度的虎杖苷干预,对照组小鼠给予同等体积的生理盐水,治疗结束后测定口服葡萄糖耐量(OGTT)和空腹血清胰岛素(FINS)水平来评估小鼠胰岛素抵抗程度,ELISA试剂盒检测小鼠血清雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)、血清游离睾酮(FT)的水平,评估虎杖苷对PCOS小鼠HPO轴的影响;卵巢组织石蜡切片IHC方法分析3β-HSD和StAR蛋白的表达水平,RT-PCR手段检测卵巢组织及体外培养细胞内CYP11a1,CYP17a1,3β-HSD,StAR及NR4A1基因的表达水平。结果:不同剂量(5mg/Kg,10mg/Kg)的虎杖苷分别作用于PCOS小鼠,给药21天后,发现各浓度的虎杖苷对PCOS小鼠的体重及血清FSH水平并无明显影响,各组之间无明显差异;虎杖苷能够明显降低PCOS小鼠血清E2和血清T水平(P0.05);此外,虎杖苷在降低PCOS小鼠血清FINS水平方面也发挥重要的作用,差异具有统计学意义(P0.01),此外,对胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的分析也验证了上述结果,对照组和虎杖苷治疗组的胰岛素抵抗指数差异显著(P0.001);低剂量虎杖苷能够增加PCOS小鼠血清LH浓度;卵巢内卵泡计数结果显示,虎杖苷治疗组小鼠卵巢内初级卵泡比例减少,处于更高发育阶段的卵泡比例明显增加,差异具有统计学意义(P0.05),并且在此基础上,虎杖苷对于总卵泡数并无明显影响,各组小鼠总卵泡数之间的差异无统计学意义(P0.05);蛋白水平分析发现,治疗组小鼠卵巢内StAR及3β-HSD蛋白的表达显著减少(P0.05),与RNA水平分析结果一致:CYP11a1,NR4A1基因的表达也明显下调;但是CYP17A1基因的表达水平却在高剂量组表达增加(P0.01),在10mg/Kg时未见明显改变;原代卵泡膜细胞内RNA水平的分析发现,虎杖苷能显著下调CYP11a1,CYP17a1,3β-HSD,StAR及NR4A1基因的表达,且差异显著(P0.01)。结论:虎杖苷能够降低PCOS小鼠血清胰岛素水平,减轻其胰岛素抵抗状态;能通过下调卵泡膜细胞内雄激素合成相关酶(CYP11a1,CYP17a1,3β-HSD,StAR及NR4A1)的表达水平,抑制PCOS小鼠卵巢内卵泡膜细胞中雄激素的合成,显著改善PCOS小鼠的代谢综合征;能够减少PCOS小鼠卵巢内原始卵泡的募集,促进卵泡的发育、成熟;在PCOS小鼠的治疗上发挥积极的作用,为探明多囊卵巢综合征的发病机制提供新的视角。
【图文】：

虎杖苷,结构式

性心脏病的风险；能够在体内有效清除细胞内产生的氧自由氧化应激产物的堆积，保护细胞内线粒体的功能[6,7]。此外，虎RT-1，发挥保护神经，治疗糖尿病，减轻脂肪堆积的作用，研究通过一方面诱导脂肪细胞发生凋亡，抑制细胞的分化、增殖，，促代谢[8]，另一方面激活瘦素信号通路[9]，在减重过程中发挥重要研究发现，虎杖苷能够通过激活小鼠体内 SIRT-1 基因的活性，内 PGC-1 蛋白的表达，增强肌细胞内线粒体的氧化能力，促进改善肌细胞对胰岛素的敏感性[10,11]。DNA 聚合酶在细胞的增殖要的作用，聚合酶活性下降可明显减慢细胞的增殖速度，虎杖苷酶的活性方面的作用显著，因而能抑制胞内 DNA 的生物合成胞增殖速度，发挥显著抑制多种肿瘤细胞的生长与侵袭（肝癌，结肠癌细胞，胃癌细胞，白血病等）[12-18]。除上述众多生物效还具有其他功效，比如抗菌[1,18]，调节免疫[19]，舒张呼吸道平滑21]等功效，因此针对于虎杖苷的研究也是近年来研究的热点。

小鼠,外观,虎杖苷,卵巢

图 2. 造模前后小鼠外观1.6 小鼠口服糖耐量检测在虎杖苷治疗结束的第二天进行 OGTT 监测。虎杖苷治疗最后一日夜间禁 8-12h，自由饮水，次日晨取尾静脉血进行空腹血糖的测定，灌胃服糖剂量：/Kg，然后测定服糖后 30min，60min，120min，180min 的血糖水平。1.7 小鼠血清、卵巢组织的获取及检测血清激素指标OGTT 监测结束后立即恢复小鼠饮食，于当日夜再次对小鼠禁食 8-12h，不水，第二日通过摘除眼球方式收集小鼠血液，然后运用 4℃离心机，3500r 离 15min 后取血清，于-20℃冰箱冷冻保存，以备进行血清指标的检测。剃干净侧卵巢周围组织，一侧卵巢用于石蜡切片的制作，置于 4%多聚甲醛中常温固，另一侧卵巢用于后期 RNA 实验，置-80℃冰箱冷冻保存。ELISA 法测定小鼠血清中 E2、FSH、LH、T 及 INS 的水平，操作流程严格守试剂盒说明。
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R711.75

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