卵巢癌基因甲基化、PD-L1蛋白表达与临床特征的关系及化疗联合PD-L1 mAb疗效的研究

发布时间：2020-03-31 07:42

【摘要】：恶性肿瘤严重危害人们的身心健康,随着经济的发展和人们生活水平的提高,肿瘤的发病率呈逐年上升的态势,目前卵巢癌已经成为威胁广大女性健康最常见的恶性肿瘤之一。早期卵巢癌经过治疗五年生存率超过70%,而初诊时已经晚期的卵巢癌五年生存率却不到30%。卵巢癌的一线治疗方案是肿瘤细胞减灭术和以铂类、紫杉醇为基础的化疗。尽管大多数患者对初始治疗方案较为敏感,但仍有超过70%的患者在初次治疗缓解后的16-18个月内会出现肿瘤的复发、转移,并最终死于卵巢癌。近年来,卵巢癌的死亡率并没有实质性的减少。因此,我们需要寻找新的分子生物学标记物及早期诊断和治疗的方法以改善患者的预后。研究显示BRCA1基因突变主要存在于家族遗传性乳腺癌/卵巢癌中,在散发性卵巢癌中BRCA1基因突变率很低。然而散发性卵巢癌与家族遗传性卵巢癌却常常具有十分相似的生物学及临床病理学表现。所以我们推测,在散发性卵巢癌中除了基因突变外还可能存在其他分子生物学事件导致BRCA1等基因生物活性的异常。现已被广泛认可的是在散发性卵巢癌中存在抑癌基因BRCA1的表观遗传学异常,即基因启动子的甲基化。多篇文献表明,抑癌基因见ASSF1A的甲基化也是卵巢癌发生发展过程中非常重要的分子生物学事件。而且甲基化抑制剂可以增加肿瘤细胞中免疫相关分子的表达,甲基化抑制剂与免疫抑制剂联合应用可以改善肿瘤患者的预后,明显延长生存期。与几乎不可逆的基因突变不同,甲基化改变是可逆的,该特性提示甲基化有可能作为潜在的治疗靶标。本研究第一部分拟探讨BRCA1、RASSF1A基因甲基化与PD-L1蛋白表达之间的相互关系以及上述分子生物学标记物的表达与卵巢癌临床病理特征、预后的相关性,以期为卵巢癌的早期诊断、预后评估以及甲基化转移酶抑制剂与PD-L1抑制剂的联合应用等提供一定的理论依据和参考。免疫治疗近年来正成为研究的热点,程序性死亡受体1(programmed death-1,PD-1)通路的免疫抑制剂在多种实体瘤,尤其是在恶性黑色素瘤、肾细胞癌和非小细胞肺癌中表现出了强大的抗肿瘤效果。但是对于晚期卵巢癌,由于体内肿瘤负荷重,抗肿瘤免疫微环境发生了改变,机体不能启动有效的肿瘤免疫应答反应,从而对单一的免疫治疗不敏感。对于弱免疫源性的肿瘤如ID8卵巢癌,单一的免疫治疗效果也并不理想。本研究第二部分拟探索卡铂联合PD-L1抑制剂对小鼠ID8卵巢癌的抑制作用及其相应的免疫学机制。本论文的两部分简述如下:第一部分:选取散发性卵巢癌患者的肿瘤组织,分别用焦磷酸测序和免疫组织化学染色技术检测BRCA1、RASSF1A基因甲基化水平和PD-L1蛋白的表达情况,探讨其与卵巢癌临床特征、病理因素及预后的相关性,并探索BRCA1、RASSF1A甲基化与PD-L1蛋白表达之间的相互关系,为卵巢癌患者的早期诊断和个体化治疗提供数据及理论基础,同时也为后续甲基化抑制剂与PD-L1拮抗剂的联合应用提供研究方向。结果显示,BRCA1高甲基化与浆液性卵巢癌密切相关(P0.05);RASSF1A高甲基化与非浆液性卵巢癌、早期(FIGOI+II)卵巢癌及卵巢癌的低复发相关(P0.05)。RASSF1A基因高甲基化与早期卵巢癌存在显著相关性提示RASSF1A甲基化可能是卵巢癌发生的早期生物学事件,从而为卵巢癌的早期诊断提供潜在的分子生物学标记物。PD-L1的表达与卵巢癌的临床病理特征、预后及BRCA1、RASSF1A基因甲基化状态无显著相关性(P0.05)。我们首次报道了卵巢癌BRCA1、RASSF1A基因甲基化与PD-L1蛋白表达的关系,在此基础上经过进一步的研究有望为潜在的靶标治疗及预后评估提供一定的理论基础和依据,从而提高我国卵巢癌患者个体化治疗的整体水平,推进卵巢癌精准医疗的发展。第二部分:建立C57BL/6(6-8周龄)小鼠ID8卵巢癌模型,分为四个不同治疗组:空白对照组、单药PD-L1抗体组(PD-L1mAb)、单药卡铂组及卡铂+PD-L1抗体联合治疗组,用药后观察肿瘤生长、腹水形成情况及各组小鼠的总生存时间,比较各组荷瘤小鼠对不同治疗方案的敏感性。应用流式细胞技术检测各组小鼠腹水/腹腔灌洗液中肿瘤相关免疫细胞CD4+、CD8+、调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)及骨髓源性抑制细胞(myeloid derived suppressor cell,MDSC)的相对含量。结果显示单药卡铂和联合治疗组较空白对照和单药抗体组有较强的抗肿瘤效果,延长了小鼠的腹水形成时间和总生存时间。对小鼠腹水进行流式细胞学检测发现单药卡铂和联合治疗组明显增加了腹水中CD4+,CD8+T细胞的比例而降低了 MDSC和Treg细胞的比例(P0.05);从而明显增加了腹水中免疫效应CD4+,CD8+ T细胞与免疫抑制MDSC、Treg细胞的绝对比值(P0.05)。这一发现为晚期难治性卵巢癌治疗方案的选择提供了一定的研究方向和参考。
【图文】：

示意图,甲基化,位点,卵巢癌

４３．８％），生存邋６３邋例（６３／１１２，５６＿３％）。逡逑１１２例卵巢癌患者中，２２例（２２／１１２，１９．６％）出现５及Ｇ４７基因启动子甲基逡逑化（基因启动子区域ＣｐＧ位点甲基化示意图如图１－１所示）。基因甲基逡逑化与卵巢癌的组织学类型有关（Ｐ＝0．0３１），浆液性卵巢癌患者的甲基化频率明逡逑显高于非浆液性卵巢癌患者（２５．３％邋ｖｓ邋８．１％）。班基因甲基化在患者年龄、逡逑月经状态、肿瘤侧别、肿瘤分级、ＦＩＧＯ分期和淋巴结转移方面无明显差异（尸＞逡逑０．０５）。１１２例散发性卵巢癌患者中，ＰＤ－Ｌ１阳性表达者为６６例（６６／１１２，邋５８．９％）。逡逑我们的研宄显示，ＰＤ－Ｌ１蛋白在卵巢癌细胞中的表达情况（图１－２）与患者的临逡逑床病理特征，包括患者的年龄、月经状态、肿瘤侧别、组织学类型、肿瘤分级、逡逑ＦＩＧＯ分期和淋巴结转移无明显相关性（尸＞０．０５）。逡逑２４逡逑

示意图,卵巢癌细胞,甲基化水平,甲基化

逦１０逦ＬＳ７０ＺＳ３０３Ｓ４０４Ｓ５０ＳＳ６Ｉ）逡逑图１－１基因启动子区域ＣＰＧ位点甲基化示意图。蓝色框中表示９个ＣｐＧ位点的逡逑甲基化水平，，ａ，从左到右分别为３％、２％、４％、１％、２％、５％、３％、３％、３％，逡逑该样本甲基化水平为各位点甲基化的平均值，为３％；邋ｂ，从左到右分别为６６％、逡逑７６％、７９％、５９％、６８％、５８％、７３％、５０％、５６％，该样本甲基化水平为邋６５％。逡逑按照５％的截点，ａ为未甲基化样本，ｂ为甲基化样本。逡逑２６逡逑
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.31

【参考文献】