阿帕替尼联合放化疗对宫颈癌抗肿瘤作用实验研究

发布时间：2020-04-07 17:41

【摘要】：目的:宫颈癌是常见妇科恶性肿瘤,除手术外,放疗是其重要治疗措施。临床上,绝大多数宫颈癌患者确诊时已是局部进展期,放疗联合化疗是其重要治疗模式。顺铂(Cisplatin,DDP)是其最常应用的同步放化疗药物。阿帕替尼(apatinib,APA)是一种新的抗血管生成药物,对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)具有高度选择性,与放疗联合治疗肿瘤研究较少。缺乏在宫颈癌中应用研究报道。本研究主要目的是探讨阿帕替尼联合以顺铂为基础的同步放化疗的抗肿瘤作用。方法:建立人宫颈癌细胞(HeLa)荷瘤小鼠模型,将60只荷瘤裸鼠随机分为5组,每组12只:(1)对照组(Control):0.9%NS0.1ml/d ip d1-7;(2)放疗组(RT):RT 8Gy d1;(3)顺铂+放疗组(DDP+RT):DDP d1+RT 8Gy d1;(4)阿帕替尼+放疗组(APA+RT):APA 200mg/kg/d ip d1-7+RT 8Gy d7;(5)阿帕替尼+顺铂+放疗组(APA+DDP+RT):APA 200mg/kg/d ip d1-7+DDP 5mg/kg/d ig d7+RT8Gy d7。治疗结束后第2天,各组均随机取5只裸鼠行小动物~(18)F-FDG PET-CT检查,获取各组PET-CT图像及相应SUV值。随后处死已行~(18)F-FDG PET-CT检查的各组裸鼠,剥离瘤块,取各组肿瘤组织行石蜡包埋切片,免疫组化法检测VEGFR-2、CD31、γ-H2AX、Ki-67表达情况,Tunel法检测细胞凋亡。剩下的各组未处死裸鼠进入生存期及瘤体积变化观察,绘制肿瘤生长曲线及生存曲线。结果:实验研究结果显示,通过25天瘤体积观察,APA+DDP+RT组(910.46±105.47)裸鼠肿瘤终体积明显低于APA+RT组(1156.38±110.75)及DDP+RT组(1234.51±140.64),差异有统计学意义(P0.05)。APA+DDP+RT组(66.99%)的肿瘤抑制率较APA+RT组(57.00%)高10%,较DDP+RT组(52.58%)高14.41%,差异有统计学意义(P0.05)。APA+DDP+RT组(66.99%)的肿瘤抑制率是RT组(34.83%)的近2倍(P0.05)。APA+DDP+RT组(86天)中位生存期较DDP+RT组(72天)延长14天,较APA+RT组(83天)延长3天,差异有统计学意义(P0.05)。APA+RT组(83天)、APA+DDP+RT组(86天)与Control组(42天)、RT组(61天)比较,差异有统计学意义(P0.05)。免疫组化(CD31)结果显示,DDP+RT组(3.57±0.65)阳性血管数是APA+DDP+RT组(1.04±0.32)的3倍多,APA+RT组(2.16±0.42)阳性血管数是APA+DDP+RT组(1.04±0.32)的2倍多,差异有统计学意义(P0.05)。RT组(5.37±0.86)阳性血管数是APA+RT组(2.16±0.42)的2倍多,差异有统计学意义(P0.05)。Control组微血管密度(MVD)最高,阳性血管数高达7.64±0.95,与其余各组比较,差异有统计学意义(P0.05)。行VEGFR-2免疫组化检测提示,APA联合放疗后,APA+RT组(13.73±1.92)VEGFR-2阳性细胞率下降明显,明显低于RT组(78.23±5.90)及DDP+RT组(65.38±4.45),差异均有统计学意义(P0.05)。加用DDP后,APA+DDP+RT组(7.39±1.06)VEGFR-2阳性表达率下降更明显(P0.05)。行γ-H2AX免疫组化检测结果提示,DDP+RT组(41.82±4.29)γ-H2AX阳性细胞率是RT组(21.45±3.06)的近2倍,差异有统计学意义(P0.05)。再与APA联用后,APA+DDP+RT组(51.15±5.40)γ-H2AX阳性细胞率比DDP+RT组(41.82±4.29)高9.33,比APA+RT组(35.70±4.67)高15.45,差异有统计学意义(P0.05)。APA+RT组(35.70±4.67)γ-H2AX阳性细胞率与DDP+RT组(41.82±4.29)相似,差异无统计学意义(P0.05)。Control组(5.46±1.01)最低,明显低于其余各组,差异有统计学意义(P0.05)。行Ki-67免疫组化结果提示,APA联合放疗后,APA+RT组(14.40±2.72)Ki-67阳性表达率较RT组(66.78±5.01)降低近5倍,较DDP+RT组(42.64±3.23)降低近3倍,差异有统计学意义(P0.05),加用DDP后,APA+DDP+RT组(7.20±0.93)Ki-67阳性表达率成倍下降,是APA+RT组(14.40±2.72)的1/2倍,是DDP+RT组(42.64±3.23)的1/6倍,差异有统计学意义(P0.05)。Tunel法检测细胞凋亡提示,APA或DDP均能明显促进放疗后细胞凋亡,DDP+RT组(21.66±2.95)与APA+RT组(27.30±3.62)的凋亡细胞个数是RT组(10.52±2.19)的近2倍,差异有统计学意义(P0.05)。APA+DDP+RT组(36.35±3.95)凋亡细胞个数最高,比DDP+RT组(21.66±2.95)高14.69,比APA+RT组(27.30±3.62)高9.05,差异有统计学意义(P0.05)。Control组(5.33±1.53)凋亡细胞个数最低,明显低于其余各组,差异有统计学意义(P0.05)。行小动物~(18)F-FDG PET-CT提示,APA+RT组(1.52±0.0.08)及DDP+RT组(1.91±0.19)SUV值较RT组(2.61±0.23)低,差异有统计学意义(P0.05)。APA+DDP+RT组(0.82±0.06)SUV值较APA+RT组(1.52±0.08)与DDP+RT组(1.91±0.19)成倍下降,差异有统计学意义(P0.05)。Control组(3.21±0.34)SUV值最高,与其余各组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:1.阿帕替尼联合顺铂能明显增强放射线对宫颈癌作用,其作用机制可能与抗肿瘤血管生成、DNA双链断裂、抑制增殖、促进凋亡相关;2.阿帕替尼联合以顺铂为基础的同步放化疗能明显抑制宫颈癌移植瘤模型的生长,延长裸鼠生存期。
【图文】：

药物体内器官毒性评价

图 6 肿瘤生长曲线及生存曲线图A：各组裸鼠移植瘤生长曲线图；B：从开始治疗到裸鼠死亡的生存曲线图*P＜0.05 与其余各组比较，差异有统计学意义；#P ＜0.05 与其余各组比较，，差异有统计学意义。
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.33

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本文编号：2618191