PRMT5协同Snail和NuRD（MTA1）复合物发挥表观调控作用促进宫颈癌的转移

发布时间：2020-04-13 00:59

【摘要】：研究目的:本研究旨在通过对PRMT5和与PRMT5相互作用的Snail和Nu RD(MTA1)复合物相互作用机制以及功能的研究,对PRMT5在肿瘤发生发展中的作用有更深入的了解,对PRMT5作为肿瘤检测、治疗新靶点的可能性提供依据。具体分为以下三点:1、探索与PRMT5相关联的蛋白以及蛋白之间相互作用的方式。2、探讨PRMT5、Snail和Nu RD(MTA1)复合物相互结合构成的复合物在转录调控中发挥的作用以及方式。3、探究PRMT5在宫颈癌侵袭转移以及在其它肿瘤发生发展中的作用。研究方法:1、通过免疫亲和纯化联合银染质谱分析的方法,鉴定可能与PRMT5结合的蛋白,应用免疫共沉淀(co-IP)和快速蛋白液相色谱技术(FPLC)的实验方法对银染结果进行验证,并利用GST pulldown实验进一步验证蛋白的结合机制。2、利用Ch IP技术联合Ch IP-seq测序分析寻找PRMT5/Snail/Nu RD(MTA1)复合物三者共同调控的靶基因,并通过q Ch IP方法,验证三者调控的靶基因,以及三者对靶基因转录调控的方式。3、利用宫颈癌细胞系进行体外实验,包括检测EMT标志物表达的实验、划痕修复实验和Transwell实验;NOD-SCID小鼠构建动物模型进行宫颈癌细胞体内原位成瘤和转移的检测。4、收集宫颈癌组织和癌旁组织标本,用PRMT5的特异抗体进行免疫组化的染色分析,并检测多种肿瘤组织标本中PRMT5的表达水平。结果:1、PRMT5可以与转录因子Snail和Nu RD(MTA1)复合物相互结合为一个有机整体发挥表观遗传调控作用。2、PRMT5、Snail和Nu RD(MTA1)复合物可以作为一个整体参与转录调控,共同抑制某些靶基因的表达;并且三者发挥调控作用的模式可能是协同作用,Snail作为一个转录因子可以识别并结合在靶基因的启动子区域,进而招募PRMT5、Nu RD(MTA1)复合物催化组蛋白的对称性二甲基化并去组蛋白乙酰化,使染色质结构紧密,抑制靶基因E-cadherin、?-catenin和GATA3等的转录。3、PRMT5在体外和体内都能促进宫颈癌细胞的侵袭转移。此外,悬浮成球实验发现PRMT5的表达与宫颈癌细胞的干性正相关,进一步证实PRMT5对宫颈癌细胞侵袭转移具有重要作用。4、PRMT5在宫颈癌组织中表达增高,并且随着病理分级的增高表达升高;多种肿瘤组织标本的免疫组化分析结果表明PRMT5在多种肿瘤组织中高表达。结论:我们的研究首次发现并鉴定了PRMT5/Snail/Nu RD(MTA1)相互结合为一个有机整体,通过抑制E-cadherin、?-catenin和GATA3的表达参与到肿瘤细胞的EMT和侵袭转移的调控,对宫颈癌以及多种肿瘤的发生和转移起促进作用。首次发现PRMT5在宫颈癌和多种肿瘤组织中高表达,提示PRMT5可能是一个潜在的肿瘤标记物,为宫颈癌以及其它肿瘤的诊断和治疗提供了一个新的靶点。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.33

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