雷帕霉素通过调控自噬延缓薄型子宫内膜的形成

发布时间：2020-04-13 23:45

【摘要】：研究背景:薄型子宫内膜的定义迄今尚未达成明确共识。适宜厚度的子宫内膜为受精卵成功宫腔内种植的必要条件。相关研究表明,在一定情况下,妊娠率与患者年龄及胚胎质量无明显关系,而与子宫内膜厚度呈正相关。子宫内膜过薄可能与螺旋动脉及卵巢动脉相关,而动脉血流的灌注不足不仅影响受精卵着床,还可能由于局部缺氧不利于胚胎生长。薄型子宫内膜不仅影响受精卵种植,还可增加生化妊娠/自然流产风险,同时也是月经过少,闭经及不孕等的重要影响因素。薄型子宫内膜的病因至今未明,全身因素(年龄及内分泌),局部因素(宫腔操作史及子宫疾病史),外用药物及其他基础疾病因素,隐匿性不明因素等均被提出为薄型子宫内膜发生发展过程的促进因素;至今尚无任何学说系统阐述该疾病的发生发展过程;也尚无任何治疗方式被证明显著有效。因此探究该疾病可能的发病机制及治疗途径尤为必要。研究目的:1.通过雷帕霉素药物治疗双侧子宫动脉结扎的大鼠薄型子宫内膜模型,在动物水平上研究雷帕霉素对薄型子宫内膜的疗效及可能的分子机制。2.通过雷帕霉素及3-MA药物处理炎症环境中的人子宫内膜原代细胞,在细胞水平上探究雷帕霉素治疗薄型子宫内膜的分子机制。研究方法:1.利用周龄为8-10周的雌性SD大鼠,建立双侧子宫动脉结扎的子宫缺血缺氧薄型子宫内膜模型并用雷帕霉素干预4周后,对离体子宫进行切片、染色并组织形态学分析;RT-PCR检测子宫内膜的表型蛋白及自噬相关蛋白的表达水平,初步探究雷帕霉素对缺血缺氧的子宫内膜的影响及潜在分子机制。2.分离、培养人子宫内膜腺上皮细胞(HEEC)及间质细胞(HESC);采用免疫荧光方法鉴定原代细胞;不同浓度的IL-1β分别处理HEEC及HESC,免疫荧光及Western blot检测子宫内膜标志性蛋白Vimentin及Cytokeratin 8,自噬相关蛋白Beclin-1、LC3及p-mTOR的蛋白表达水平;雷帕霉素及3-MA分别干预IL-1β预处理的HEEC及HESC,免疫荧光及Western blot检测子宫内膜标志性蛋白Vimentin及Cytokeratin 8,自噬相关蛋白Beclin-1、LC3及p-mTOR的蛋白表达水平,研究二者的相关性。研究结果:1.动情周期同一时期内,手术组的子宫内膜测量厚度较假手术组减少;手术给药组的子宫内膜测量厚度较手术对照组增加;手术组的子宫内膜间质细胞标志性蛋白vimentin的mRNA水平较假手术组减少,而子宫内膜腺上皮细胞标志性蛋白keratin8的mRNA水平各组间无显著差异;自噬相关指标的mRNA水平较假手术组减少;手术给药组的子宫内膜间质上皮细胞标志性蛋白vimentin的mRNA水平较手术对照组增加,子宫内膜腺上皮细胞标志性蛋白keratin8两组间无显著差异,自噬相关指标Beclin1的mRNA水平较手术对照组增加,LC3B的mRNA水平较手术对照组无显著差异。2.IL-1β能抑制子宫内膜两种重要细胞的标志性蛋白的表达,IL-1β浓度为20ng/ml时,标志性蛋白均受到明显抑制,为细胞水平上模拟薄型子宫内膜病理生理过程的适宜造模浓度。3.IL-1β双向调控HESC及HEEC的自噬水平;低浓度时促进自噬相关蛋白的表达,高浓度时抑制自噬蛋白的表达,当浓度为20ng/ml时,两种细胞自噬均被明显抑制。4.HESC及HEEC的表型蛋白与自噬水平存在一定相关性,自噬促进表型蛋白的表达;IL-1β通过双向调控HESC及HEEC自噬水平,进而影响其表型蛋白的表达;雷帕霉素可上调HESC及HEEC的自噬水平,拮抗高浓度IL-1β对表型蛋白的抑制作用。研究结论:1.雷帕霉素通过调控子宫内膜细胞自噬水平,减缓大鼠薄型子宫内膜的形成。2.不同浓度的IL-1β调控HESC及HEEC的标志性蛋白的表达。3.不同浓度的IL-1β双向调控HESC及HEEC的自噬水平。4.雷帕霉素通过调控自噬,拮抗IL-1β对HESC及HEEC表型蛋白的抑制作用。
【图文】：

大鼠薄型子宫内膜的造模方式

图 1-2 各组大鼠体重情况；Sham + DMSO：假手术对照组，Sham + RA：假手术给药组；Operated + DMSO：手术对照组；Operated + RA：手术给药组。如图 1-2 所示，，各组大鼠在处理前体重无明显差异（P＞0.05），在药物处
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R711.74

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本文编号：2626595