FAM19A4基因启动子甲基化在宫颈癌及其癌前病变诊断中的作用研究

发布时间：2020-04-18 12:54

【摘要】：引言宫颈癌是女性第二大常见恶性肿瘤,死亡率居女性恶性肿瘤第三位,其中约90%的宫颈癌死亡发生在发展中国家。宫颈癌筛查的普及和人乳头瘤病毒(Human Papillomavirus,HPV)疫苗的使用,使宫颈癌成为可预防的恶性肿瘤。但是HPV和细胞学筛查仍存在较大的漏诊风险,宫颈癌缺乏精准的早期筛查标志物。因此,寻找能够有效识别宫颈癌及其癌前病变的特异性分子标志物,补充目前宫颈癌早期筛查方法的不足,具有重要意义。研究表明DNA甲基化是恶性肿瘤发生的早期事件,且与宫颈癌的发生发展密切相关,可作为宫颈癌早期诊断的特异性分子标志,应用DNA甲基化检测技术能提高宫颈癌早期诊断的检出率。具有序列相似性的19家族(趋化因子(C-Cmotif)-样)成员A4(family with sequence similarity 19 member A4,FAM19A4)是TAFA基因家族成员,国外已有研究发现FAM19A4基因启动子甲基化能有效识别宫颈癌及其癌前病变,有望成为新型肿瘤标记物。但国内外目前尚无文献报道FAM19A4基因启动子甲基化与中国妇女宫颈疾病相关性的研究,也无FAM19A4基因启动子甲基化与宫颈癌临床病理特征及HPV感染型别相关性的研究。为探讨FAM19A4基因启动子甲基化在我国妇女宫颈癌及其癌前病变诊断中的价值,在国外研究基础上,本文采用双探针荧光定量PCR(Taqman probe-based quantitative PCR,q PCR)技术,从宫颈石蜡包埋组织(formalin-fixed and parrffin-embedded,FFPE)和hr-HPV阳性患者的宫颈细胞刷液两种标本中,检测不同宫颈疾病中FAM19A4基因启动子甲基化情况,并比较该基因甲基化在宫颈癌的不同临床病理特征和不同HPV型别中的差异,分析该基因甲基化在宫颈癌及其癌前病变中的诊断价值。第一部分FAM19A4基因启动子甲基化检测在宫颈癌及其癌前病变组织中的临床意义目的检测宫颈癌、宫颈癌前病变及正常宫颈/宫颈炎的FFPE标本中,FAM19A4基因启动子甲基化的表达情况,并探讨FAM19A4甲基化对宫颈癌及其癌前病变的诊断价值。方法分别随机选取31例、22例及23例经病理确诊为宫颈癌、宫颈HSIL(CINⅢ)及正常宫颈/宫颈炎的FFPE标本,采用q PCR技术分别检测三组FFPE标本中FAM19A4基因启动子甲基化的表达情况,并采用SPSS 23.0软件进行统计学分析,评估该基因甲基化在宫颈癌及其癌前病变诊断中的价值。结果1.FAM19A4基因甲基化检出率在正常宫颈/宫颈炎、宫颈HSIL及宫颈癌的FFPE标本中分别为8.70%(2/23)、72.73%(16/22)和96.77%(30/31),三组间甲基化检出率存在统计学差异(P0.05),且随着宫颈病变严重程度增加,FAM19A4甲基化的检出率逐渐升高(Cochran-Armitage趋势检验,P0.05)。2.三组样本卡方检验后的两两比较分析显示,宫颈癌组的FAM19A4基因启动子甲基化阳性检出率高于宫颈HSIL组(96.77%vs 72.73%,P0.05);宫颈癌组的FAM19A4基因启动子甲基化阳性检出率高于正常宫颈/宫颈炎组(96.77%vs 8.70%,P0.05);及宫颈HSIL组的FAM19A4基因甲基化检出率也高于正常宫颈/宫颈炎组(72.72%vs 8.70%,P0.05)。3.FAM19A4基因启动子的甲基化检出情况,在宫颈癌不同年龄段、不同病理类型、不同临床分期、不同肿瘤大小及不同淋巴结转移状态中的差异均无统计学意义(P0.05)。结论FAM19A4基因可能是宫颈细胞癌变的特异性分子标志物。从正常宫颈到癌前病变再向浸润癌的进展过程中,FAM19A4基因启动子甲基化检出率逐渐升高,提示该基因甲基化可能在宫颈癌的发生发展中起着一定作用。第二部分hr-HPV阳性宫颈细胞刷液中FAM19A4基因启动子甲基化检测在宫颈癌及其癌前病变诊断中的临床意义目的检测高危型HPV(high-risk types of human papillomavirus,hr-HPV)阳性患者的宫颈细胞刷液中,FAM19A4基因启动子甲基化在不同宫颈疾病中的表达情况,探索AM19A4甲基化与宫颈癌临床病理特征及HPV感染型别的相关性,及比较该基因甲基化与细胞学、HPV16/18分型在宫颈癌及其癌前病变诊断中的差异和价值。方法选取264例hr-HPV阳性(包括HP16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,66和68)患者的宫颈细胞刷液,经2位以上病理医师确定组织学诊断分别为宫颈癌72例、宫颈HSIL 70例、宫颈LSIL 45例及正常宫颈/宫颈炎77例,采用q PCR技术分别检测五组不同宫颈疾病的细胞刷液中,FAM19A4基因启动子甲基化的表达情况,并采用SPSS 23.0软件进行统计学分析。检测FAM19A4甲基化表达在不同临床病理特征的宫颈癌及不同HPV感染型别中的差异。同时比较HPV16/18分型、细胞学检测和FAM19A4甲基化三种方法,在检测HSIL以上病变(≥HSIL/HSIL+)时的灵敏度、特异度、阳性预测值(Positive predictive value,PPV)、阴性预测值(Negative predictive value,NPV)及约登指数(Youden’s index,YI)的差异,评估该基因甲基化在宫颈癌及其癌前病变早期诊断中的价值。结果1.FAM19A4基因启动子甲基化检出率分别为:正常宫颈/宫颈炎组9.09%(7/77)、宫颈LSIL组24.44%(11/45)、宫颈HSIL组58.57%(41/70)及宫颈癌组94.44%(68/72),四组别间差异具有统计学意义(P0.05),且随着宫颈病变严重程度增加,FAM19A4甲基化的检出率逐渐升高(Cochran-Armitage趋势检验,P0.05)。2.五组卡方检验后的两两比较分析显示,任意两组别间的FAM19A4基因启动子甲基化检出率的差异均有统计学意义(P0.05)。3.与正常宫颈/宫颈炎组相比,宫颈癌、宫颈HSIL及宫颈LSIL组中FAM19A4基因启动子甲基化检出率的OR值分别170.00(95%CI:47.60-607.16)、14.138(95%CI:5.685-35.156)、3.24(95%CI:1.15-9.08),均有统计学意义。4.72例hr-HPV阳性宫颈癌细胞刷液中,FAM19A4基因启动子的甲基化检出情况,在宫颈癌不同年龄段、不同病理类型、不同临床分期、不同肿瘤大小、和不同淋巴结转移状态中均无统计学差异(P0.05)。5.不同HPV分型与FAM19A4基因启动子甲基化检出率间存在相关性(P0.05)。在所有hr-HPV阳性患者的宫颈细胞刷液中,FAM19A4基因启动子甲基化检出率在HPV16/18感染组别中高于非HPV16/18感染组(66.15%vs 30.60%,P0.05)。在非癌变的hr-HPV阳性宫颈细胞刷液中,FAM19A4基因启动子甲基化检出率在HPV16/18感染组别中仍高于非HPV16/18感染组(43.84%vs22.69%,P0.05)。6.FAM19A4基因启动子甲基化在检测≥宫颈HSIL病变时的灵敏度稍低于HPV16/18分型联合细胞学检测(85.84%vs 93.81%),但特异度、PPV、NPV及YI均高于联合检测。与单独FAM19A4甲基化检测相比,FAM19A4甲基化联合HPV16/18分型检测后,在检测≥宫颈HSIL病变时的灵敏度和NPV均稍增高,但特异度、PPV及YI均明显下降。结论1.hr-HPV阳性细胞刷液中,FAM19A4基因可能是宫颈癌的特异性肿瘤标记物。随着宫颈病变进展,FAM19A4基因甲基化检出率逐渐升高,表明该基因甲基化可能与宫颈癌的发生发展密切相关。2.与传统HPV分型和细胞学检查相比,FAM19A4基因启动子甲基化在诊断≥宫颈HSIL病变时具有优势,FAM19A4甲基化能提高宫颈癌及其癌前病变检出的准确率,有望成为宫颈癌诊断的一种辅助手段。
【图文】：

曲线,宫颈癌,内参,基因扩增

图 1: ddH2O、正常外周血及宫颈癌的 FAM19A4 及内参 ACTB 基因扩增曲线Figure 1: Amplification curves of ddH2O, normal peripheral blood DNA ancervical cancer samples3 统计学方法采用 SPSS 23．0 软件进行统计学分析，所有统计检验均为双侧检验。计量资料以均数标准差（ SD）表示。计量资料的两独立样本比较采用 Mann-Whitney 检验， =0.05。计量资料的多样本比较采用 Kruskal-Wallis H 检验， =0.05；组间的两两比较采取 Bonferroni 校正，矫正后的检验水准 =0.05/比较次数。计数资料采用 Pearson 卡方检验或 Fisher 精确概率法， =0.05；组间的两两比较采取Bonferroni 校正，矫正后的检验水准 =0.05/比较次数。线性趋势采用 Cochran-Armitage 趋势检验， =0.05。定义 P<0.05 为差异有统计学意义。
【学位授予单位】：广州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.33

【参考文献】