Keap1-Nrf2信号通路参与子宫内膜癌细胞增殖、转移、耐药机制的研究

发布时间：2020-04-21 20:43

【摘要】：目的:研究Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)-核转录因子E2相关因子(Nrf2)信号通路对子宫内膜癌细胞生长、转移及耐药的影响。方法:选择代表I型子宫内膜癌细胞的KLE细胞株和代表II型子宫内膜癌的ARK2细胞株,采用real-time PCR和Western blot法测定两细胞株Keap1和Nrf2基因m RNA、蛋白表达,MTT法检测两细胞株对顺铂耐药性。对Keap1表达更低、耐药性更强的ARK2细胞株的Keap1基因过表达。Real-time PCR、Western blot、平板克隆实验、MTT法、Transwell迁徙、侵袭实验等方法研究ARK2细胞中Keap1过表达对Nrf2及下游靶基因表达、细胞生长、侵袭、耐药的影响。结果:在ARK2和KLE细胞中Nrf2基因m RNA表达无明显差异,ARK2细胞中Keap1基因表达无论是m RNA还是蛋白水平在的表达均要低于KLE细胞株,而Nrf2蛋白水平的表达在ARK2细胞株中则要明显高于KLE细胞株。Keap1表达较低的ARK2细胞较Keap1高表达的KLE细胞耐药性更高。ARK2细胞株中Keap1过表达能够明显下调Nrf2蛋白及下游基因ABCC2、γ-GCS表达;MTT实验和平板克隆实验表明Keap1过表达能够降低ARK2细胞增殖能力;Keap1过表达能够降低ARK2细胞迁徙和侵袭能力;Keap1过表达能够显著提高ARK2细胞对顺铂的敏感性。结论:Keap-Nrf2信号通路在子宫内膜浆液性癌细胞株ARK2中活化程度显著高于子宫内膜样癌细胞株KLE,Keap1对Nrf2蛋白表达调控是基于转录后的,且低表达的Keap1及高表达的Nrf2蛋白和肿瘤细胞的高耐药性有关。在子宫内膜浆液性癌细胞株ARK2中上调Keap1基因表达能够有效的下调Nrf2蛋白及其下游基因的表达,并降低肿瘤细胞的生长、迁徙、侵袭能力,且能提高肿瘤细胞对顺铂的敏感性。
【图文】：

现代生物医学进展www.biomed.cnjournals.comProgressinModernBiomedicineVol.19NO.1JAN.2019图6MTT法比较ARK2和ARK2-K细胞在不同浓度顺铂作用48小时后的细胞存活率比较Fig.6ARK2andARK2-Kcellsweretreatedwiththeindicateddosesofcisplatinlfor48h.CellviabilitywasdeterminedbyMTTassay.注：*表示P<0.05.Note:*meansP<0.05.图5Transwell法比较ARK2和ARK2-K细胞迁徙和侵袭能力注：ARK2细胞（A）和ARK2-K细胞（B）迁徙能力比较；ARK2细胞（C）和ARK2-K细胞（D）侵袭能力比较。Fig.5ThemigrationandinvasionofARK2andARK2-KcellswerecomparedbyTranswellmethodNote:ThemigrationabilityofARK2cells(A)andARK2-Kcells;(B)werecompared;andtheinvasionabilitiesofARK2cells;(C)andARK2-Kcells;(D)werecompared.但Nrf2mRNA表达在ARK2和KLE细胞中无明显差别，而Keap1表达无论是mRNA还是蛋白表达在ARK2细胞中的表达均要低于KLE细胞株，说明在子宫内膜癌细胞中，Keap1对Nrf2的调控是基于转录后的。之前的研究表明Nrf2和肿瘤的增殖、迁徙、侵袭密切相关。肿瘤细胞的上皮间质化和增殖及侵袭密切相关，出现上皮间质化的肿瘤细胞中N-cadherin的过表达能够增加Nrf2的活性[24]。在食管癌细胞中抑制Nrf2的表达后MMP2等侵袭相关基因的表达明显降低，并且能够上调E-cadherin的表达，使得肿瘤细胞的生长、侵袭能力明显降低[25]。在本研究中我们在在子宫内膜浆液性癌来源的细胞株ARK2中上调Keap1表达，能够显著的降低ARK2细胞中Nrf2蛋白及其下游耐药相关基因ABCC2、γ-GCS的

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