FOXO3a在早孕小鼠子宫内膜蜕膜化中的作用及机制研究

发布时间：2020-05-05 04:22

【摘要】：目的:胚胎着床取决于具有活性的胚胎和容受态子宫之间相互作用,此过程中伴随着母体子宫内膜蜕膜化发生。早孕小鼠子宫内膜蜕膜化是小鼠子宫内膜基质细胞增殖、分化为一种特殊的蜕膜细胞的过程,在胎盘形成以前为胚胎发育提供支持和营养。FOXO3a(Forkhead box O3a)是一种高度保守的转录因子,参与细胞生长、增殖、分化等多种生理过程。研究发现FOXO3a在多种组织器官及细胞增殖分化过程中发挥了重要作用,但在子宫内膜蜕膜化过程中的作用尚不明确。因此,本文旨在研究FOXO3a在早孕小鼠子宫内膜蜕膜化过程中的作用及可能机制。方法:1.构建小鼠正常妊娠模型及假孕模型,采用Western blot、免疫组化检测小鼠子宫内膜FOXO3a的表达规律。2.构建小鼠体内人工诱导蜕膜化模型及体外原代子宫内膜基质细胞蜕膜化诱导模型,采用Western blot、免疫组化、免疫荧光、RT-PCR检测体内外人工诱导蜕膜化后FOXO3a的表达情况。在上述模型中采用FOXO3a-siRNA干扰后进一步检测蜕膜化标志分子的表达,以探讨干扰FOXO3a表达是否影响子宫内膜蜕膜化。3.构建FOXO3a-siRNA干扰的小鼠体内人工诱导蜕膜化模型及体外原代子宫基质细胞蜕膜化诱导模型,采用Western blot、免疫组化、RT-PCR、流式细胞术等检测细胞增殖、凋亡情况,初步探讨FOXO3调节子宫内膜蜕膜化是否与细胞增殖、凋亡有关。4.构建FOXO3a-siRNA干扰的小鼠正常妊娠模型,观察早孕小鼠孕第7天的子宫形态及胚胎着床情况,并采用各种分子生物学方法检测蜕膜化标志分子的表达以及细胞增殖、凋亡情况,利用体内正常妊娠模型再次验证FOXO3a对早孕小鼠子宫内膜蜕膜化的调节作用。结果:1.Western blot和免疫组化检测结果显示,与孕第1天相比较,FOXO3a在早孕小鼠孕第4-7天表达明显升高,且在着床点子宫内膜处的表达显著高于相同孕天着床旁子宫内膜。着床点处FOXO3a的表达主要定位于子宫基质细胞和腺上皮细胞。假孕模型检测结果显示,与假孕第1天相比较,假孕第6天FOXO3a的表达也显著增加。2.体内外人工诱导蜕膜化模型检测结果均显示蜕膜化诱导后FOXO3a表达显著上调。FOXO3a-siRNA干扰后小鼠蜕膜化诱导侧子宫肿胀程度不足,蜕膜化标志分子ALPL表达显著下调。与体内结果一致,将FOXO3a-siRNA体外转染原代小鼠子宫内膜基质细胞后,蜕膜化诱导受损,蜕膜化标志分子MMP9、BMP2、MMP2表达显著下调,增殖相关蛋白Ki67和PCNA表达显著上调,凋亡相关蛋白PARP、Bax、Caspase 3、Cleaved Caspase 3、Bcl-2、Fas显著下调。3.FOXO3a-siRNA干扰后,妊娠小鼠孕7天子宫着床胚胎数量显著减少。进一步检测发现,蜕膜化标志分子BMP2表达显著下调,增殖相关蛋白Ki67、PCNA表达明显上调,凋亡相关蛋白Bcl-2、Fas表达明显降低,流式细胞术检测显示细胞凋亡显著下调。结论:FOXO3a可能参与调控早孕小鼠子宫内膜蜕膜化,且这一作用可能与细胞增殖、凋亡有关。
【图文】：

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3.1 FOXO3a 在正常妊娠模型和假孕模型小鼠子宫内膜中的表达规律采用 Western blot 检测小鼠正常妊娠 D1-D7 天子宫内膜 FOXO3a 的表达，结果显示：FOXO3a 在正常妊娠 D4-D7 天的表达明显高于妊娠 D1 天(图 1A、C)。为排除胚胎信号的干扰，进一步在假孕模型中采用 Western blot 检测了子宫内膜FOXO3a 的表达。结果显示：与假孕 PD1 相比较，假孕 PD4- PD7 天的表达均显著增加，并于假孕 PD6 天表达最高(图 1B、D)。我们同时采用免疫组化检测了 FOXO3a 在早孕小鼠着床点和着床旁子宫内膜中的表达情况。结果显示：FOXO3a 在着床点子宫腺上皮、腔上皮和胚胎均有明显表达，，随着天数的增加，FOXO3a 从初级蜕膜区逐渐扩散至次级蜕膜区(图2A)。此外，免疫组化和 Western blot 结果均显示 FOXO3a 在妊娠 D5-D7 天子宫着床点的表达明显高于着床旁(图 2)。

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重庆医科大学硕士研究生学位论文Fig. 1 Expression of FOXO3a in uterine endometrium of normal pregnancy andpseudopregnancy model.A: Western blot analysis of FOXO3a on Days 1 7 of pregnancy. B: Expression of FOXO3aon Days 1 7 of pseudopregnancy. C: Histogram showing the quantification of the results forA. D: Histogram showing the quantification of the results for B. *P< 0.05, **P < 0.01, ***P <0.001.
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R714

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