miR-99a对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响及其机制

发布时间：2020-05-07 09:49

【摘要】：目的:miRNA与宫颈癌的发病密切相关,深入了解相关miRNA的功能,有利于揭示宫颈癌发病的分子机制,本研究旨在探讨miR-99a对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响及相关机制,为深入阐明宫颈癌发病机制提供实验依据。方法:1、将miR-99a mimics瞬时转染宫颈癌HeLa细胞,采用细胞生长曲线和平皿克隆形成实验,观察miR-99a对HeLa细胞增殖的影响。2、应用Targetscan 6.2软件预测miR-99a与HOXA1基因3’UTR的靶向性作用,通过荧光素酶报告基因检测,分析miR-99a对HOXA1基因表达的影响。3、利用q RT-PCR和Western-blot检测miR-99a对HOXA1表达的影响。4、构建HOXA1干扰载体,转染HeLa细胞,筛选后利用细胞生长曲线和平皿克隆实验观察HOXA1表达降低后对HeLa细胞增殖的影响。结果:1、miR-99a被导入宫颈癌Hela细胞后,细胞的生长速度减慢,miR-99a mimics组Hela细胞克隆数为156±30,与miR-ctr组(386±49)比较,克隆数减少(F=26.093,P=0.001)。2、采用Targe tscan6.2(http://www.targetscan.org/)软件分析miR-99a与HOXA1基因的作用位点发现,miR-99a与HOXA1基因3’UTR的1485-1497位核苷酸位点存在结合,miR-99a表达后,抑制Hela细胞中HOXA1的表达。3、干扰HOXA1表达后,Hela细胞生长速度减慢,平皿克隆形成能力降低,si-HOXA1克隆数为165±35,si-control克隆数为390±46,P0.05。结论miR-99a与HOXA1基因3’UTR 1485-1497位核苷酸位点结合沉默其表达,抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖。
【图文】：

第4章 结 果 检测 miR-99a 在 HeLa 细胞中的表达R-99a 对宫颈癌细胞增殖的影响，采用脂质体瞬时s 和对照序列导入 Hela 细胞，，通过 qRT-PCR 检测情况。结果显示：miR-99a mimics 导入 Hela 细光表达量明显高于对照组（图 4-1，t=64.5，P=0.002胞中呈现高表达，可用于后续实验。

图 4.2 miR-99a 高表达对 HeLa 细胞增殖的影响生长曲线观察 miR-99a 高表达对 HeLa 细胞生长的影响miR-ctr 组及未转染组比较，P<0.05。克隆形成实验观察 miR-99a 高表达对 HeLa 细胞增殖的-99a 影响 Hela 细胞克隆形成的统计分析。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.33

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本文编号：2652797