早发性卵巢功能不全患者自身抗体、T淋巴细胞亚群及细胞因子的研究

发布时间：2020-05-12 13:03

【摘要】：第一部分早发性卵巢功能不全患者自身抗体的研究背景:早发性卵巢功能不全(POI)是一种临床特征具有高度异质性,病因复杂的生殖内分泌疾病,是造成育龄期女性不孕不育的主要原因之一。POI的病因混杂,目前已知的因素有遗传、免疫、感染及医源性因素等,但大多数POI病因仍不明确,属于特发性POI。研究显示自身免疫异常在POI中占4%-30%不等,主要包括免疫性卵巢炎、伴发相关自身免疫性疾病及存在抗卵巢自身免疫性抗体。目前临床尚无可靠的免疫检测或诊断指标来早期诊断自身免疫性POI。由于卵巢自身免疫异常的诊断需要依靠卵巢活检,因其有创性难以在临床推广。血清自身抗体有可能作为预测POI发生风险的标记物。POI患者体内存在很多针对抗卵巢各种组成成分的自身抗体,都可以成为免疫攻击的靶点,既往有大量关于卵巢自身抗体的研究,但在特异性、敏感性及结果一致性等方面存在一定争议。卵巢和肾上腺拥有共同的抗原,特别是与类固醇合成相关的抗原。因此抗肾上腺皮质抗体(AAA)有可能成为POI风险预测或诊断的有效免疫标记物。但是,在特发性POI中,AAA作为自身免疫起源的重要性和作用尚不清楚。目的:本研究旨在通过检测特发性POI患者血清抗肾上腺皮质抗体(AAA)和其他非器官特异性抗体,如抗心磷脂抗体(ACA)、抗核抗体(ANA)、抗双链DNA抗体(ds-DNA)的阳性率,以期寻找一种与POI疾病相关的免疫标记物,探讨自身免疫因素在POI发病过程中的作用,为POI的早期预测及诊断提供依据。材料与方法:选择250例染色体核型正常的POI患者为研究组,256例年龄相匹配的健康女性为对照组。两组研究对象均排除卵巢手术史、自身免疫性疾病及复发性流产等病史。应用间接免疫荧光技术检测AAA的阳性率,应用酶联免疫标记法(ELISA)检测两组受试者非器官特异性抗体ANA、ACA、ds-DNA的阳性率。比较AAA阳性POI患者和AAA阴性患者临床特征的差异,并对部分患者行卵巢活检组织的组织学观察。对15例AAA阳性的POI患者的肾上腺功能进行定期随访,观察远期肾上腺功能不全的发生风险。结果:POI患者器官特异性抗体AAA的阳性率为19.2%,显著高于对照女性(5.9%,P0.01);而其他非器官特异性抗体ACA、ANA、ds-DNA的阳性率分别为0.8%、3.6%、10.0%,与对照组(0.4%、1.2%、5.9%)相比,差异均没有统计学意义(P0.05),提示POI患者存在自身免疫异常,AAA可能作为预测和诊断自身免疫性POI的标记物。AAA阳性的POI患者与AAA阴性者在年龄、FSH、初潮年龄、月经异常年龄及卵巢体积等临床特征方面无显著性差异(P0.05)。对其中13名POI(6名AAA 阳性和7名AAA阴性)患者进行腹腔镜下卵巢活检术,发现所有患者卵巢组织均萎缩,未发现卵泡结构。对15例AAA阳性的POI患者肾上腺功能相关症状随访,发现仅一名患者在POI确诊后3年出现肾上腺功能不全的症状。结论:POI患者中AAA的阳性率明显增高,提示自身免疫异常参与了POI发病,同时证实了卵巢和肾上腺的共同免疫异常机制。AAA可以作为预测和诊断卵巢自身免疫异常的标记物,但AAA在免疫性POI疾病进展中的具体作用机制尚需要进一步研究。第二部分早发性卵巢功能不全患者细胞因子的研究背景:机体免疫平衡的失调和免疫监控能力的改变是发生自身免疫性疾病的主要机制。细胞免疫异常在POI发病中发挥重要作用,免疫细胞及其分泌的细胞因子参与POI疾病的发生。有学者认为细胞因子,如IFN-γ、TNF-α和TGF-β等通过内分泌、旁分泌和(或)自分泌机制参与正常卵泡的发育、排卵及卵泡闭锁过程,同时这些细胞因子还能诱导B细胞的增殖、分化和分泌抗体,促进NK细胞、CD8+T细胞等的分化及其效能,导致卵巢自身免疫应答反应,促进颗粒细胞的凋亡,从而加快卵巢中卵泡的闭锁。目前关于POI患者细胞因子的研究极少,样本量偏少且不够系统,不足以说明细胞因子是否真正与POI疾病相关,因此需要大样本的检测来证实细胞因子在POI疾病中的作用。目的:本研究通过检测POI患者血清中多种细胞因子:IL-1 β、IL-6、IL-9、IL-17A、IL-22、IFN-γ、TGF-β1的水平,研究细胞因子在早发性卵巢功能不全患者与正常健康女性之间的差异,探讨这些细胞因子在POI发病中的作用。材料与方法:选择100例特发性POI患者为研究组,100例年龄匹配的健康女性为对照组。采用酶联免疫吸附剂测定法分别检测两组受试者外周血中细胞因子IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-9、IL-17A、IL-22、TGF-β1的水平,并对检测结果采用统计软件SPSS 22.0进行统计学分析比较。结果:研究组POI患者血清中细胞因子IL-22、IFN-γ、IL-1 β的水平分别为107.25±16.01pg/ml、2.84(1.69-3.91)pg/ml、4.46(1.94-23.42)pg/ml,均明显高于对照组(P0.05)。而POI患者细胞因子TGF-β、IL-6、IL-9的水平分别为11.43±6.23ng/ml、1.27(0.25-5.35)pg/ml、0.33(0.20-0.40)pg/ml,均明显低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。研究组POI患者血清中IL-17A水平为0.77(0.57-1.02)pg/ml,与对照组无显著性差异(P0.05)。结论:细胞因子在染色体正常的特发性POI患者中异常表达,表明细胞因子在POI疾病发生中发挥重要作用。免疫调节性细胞因子TGF-β等减少,促炎性细胞因子IFN-γ及IL-22等增多,导致卵巢局部卵泡不断受到免疫攻击,卵泡不断被耗竭,最终导致卵巢提前衰竭,可能是导致POI的原因之一。第三部分早发性卵巢功能不全患者T淋巴细胞亚群的研究背景:POI病因具有高度异质性,细胞免疫异常,尤其是CD4+辅助性T细胞失调,促炎性细胞因子协同作用可能是POI发生的重要免疫学机制。T淋巴细胞通过介导细胞免疫参与自身免疫性疾病的发生。早期研究发现POI患者外周血T淋巴细胞,尤其是CD4+T细胞升高,效应性CD8+/CD57+T细胞(细胞毒性T淋巴细胞)降低,CD4+/CD8+比率升高等,提示Thl/Th2比例失调参与POI发生。随着免疫学研究的进展,新的T淋巴细胞亚群被鉴定并分离出来,但在POI中较少研究。目前关于POI疾病中T淋巴细胞亚群的研究较少且存在争议,尚不能准确而全面地阐明T淋巴细胞亚群在POI患者中的变化及作用。目的:本研究旨在通过研究不同临床阶段POI患者外周血中Th1细胞、Th17细胞、Th22细胞及Treg细胞比例变化,明确POI患者外周血Th细胞亚群及Treg细胞的变化特点,探讨细胞免疫在早发性卵巢功能不全疾病中的作用。材料与方法:选择38例染色体核型正常的POI患者为研究对象,根据卵巢功能衰竭的程度不同分为两个研究组,POF组(FSH40IU/L)20例和POI组(25IU/LFSH40IU/L)18例;另选21例年龄相匹配的健康女性为对照组。分离外周血单个核细胞进行不同分子免疫标记,CD3+CD8-IFN-γ+的淋巴细胞为Thl细胞,CD3+CD8-IL-17+的淋巴细胞为Th17细胞,CD3+CD8-IL-22+的淋巴细胞为Th22细胞,CD4+CD25+FOXP3+的淋巴细胞为Treg细胞,采用流式细胞仪分别检测三组受试者外周血中Thl细胞、Th17细胞、Th22细胞及Treg细胞的比例。结果:Th1细胞在POF组和POI组比例分别为(9.92±2.36)%和(10.15±2.29)%,均显著高于正常对照组(5.29±1.44)%,差异有统计学意义(P0.05),而POF及POI组相比无明显差异。Th17细胞在POF组和POI组比例分别是(0.60±0.40)%和(0.67±0.39)%,而在正常对照组中则为(0.52±0.36)%,三组之间两两比较,差异均无统计学意义(P0.05)。Th22细胞在POF组和POI组比例分别是(0.33±0.12)%和(0.32±0.12)%,而在正常对照组则为(0.31±0.14)%,三组之间两两比较,差异均无统计学意义(P0.05)。Treg细胞在POF组及POI组比例分别是(2.44±1.13)%和(2.15±0.76)%,均明显低于正常对照组(4.05±1.60)%,差异有统计学意义(P0.05)。而POF及POI组两两比较无明显差异(P0.05)。结论:POI患者存在系统性免疫失调,外周血T细胞亚群的比例异常,Thl细胞占比显著升高,同时Treg细胞占比显著降低,提示细胞免疫参与了POI的发病。但T细胞亚群及细胞因子在POI疾病发生中的具体机制仍需要进一步探讨。
【图文】：

卵巢组织,组织学,卵巢,卵泡

图１－１为两位ＡＡＡ阳性Ｋ）ｌ患者卵巢活检组织＋ＨＥ染色的组织学结果：卵巢组织逡逑

对照组

逦00＾逡逑图２－１邋ＩＬ－２２：邋ＰＯＩ组明显高于对照组逦图２－２邋ＴＧＦ－Ｐ邋１：邋ＰＯＩ组明显低于对逡逑（１０７．２５±１６．０１邋ｖｓ７２．７３±１７．２１，逦照组（１１．４３±６．２３邋ｖｓ邋１７．１４±７．５３，逡逑Ｐ＜０．０１）逦Ｐ＜０．０１）逡逑４４逡逑
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R711.75

【相似文献】