脐带间充质干细胞来源胞外囊泡在小鼠卵巢功能和生育力重建中的作用

发布时间：2020-05-15 05:32

【摘要】：目的:探讨脐带间充质干细胞来源胞外囊泡在卵巢早衰小鼠卵巢功能和生育能力重建中的作用及对子代的影响。方法:实验动物分为对照组、模型组和实验组,每组各40只雌性SPF级ICR小鼠。一次性腹腔注射环磷酰胺(200 mg/kg)和白消安(20 mg/kg)建立小鼠卵巢早衰模型(模型组),经尾静脉注射0.1 ml 150μg胞外囊泡至实验组小鼠体内,对照组与模型组注射0.1 ml磷酸盐缓冲溶液(PBS),观察小鼠一般情况及体重变化。4周后各组随机选取8只小鼠行血清学、组织学及免疫组织化学检测,qPCR和Western blot检测卵巢组织凋亡相关基因及蛋白表达情况;6只小鼠行体外受精,记录取卵日E_2、获卵数、受精卵数、卵裂胚胎数及囊胚数;15只小鼠行合笼实验,记录小鼠获得妊娠时间,生育子代数目及新生小鼠体重变化。对6周龄子代小鼠行Y迷宫实验和新物体识别实验评估其学习和记忆能力。结果:(1)模型组小鼠腹腔注射CTX/BUS 14天后动情周期紊乱,体重及E_2水平下降、FSH水平升高,卵巢体积、重量和各级卵泡数目减少,免疫组化染色颗粒细胞Caspase-3表达增加(P0.05);旷场实验显示小鼠自主活动能力减弱且焦虑水平增加;体外受精结果显示,取卵日E_2水平降低,获卵数、受精卵数、囊胚数均显著减少,合笼后无雌鼠获得妊娠,空白组雌鼠均妊娠并产仔(0 vs 11.17,P0.05)。(2)实验组小鼠给药后4周,体重和卵巢重量较模型组显著增加;与模型组相比,E_2水平升高、FSH水平下降,但三组间激素水平无显著性差异;组织学检查显示小鼠始基卵泡、初级卵泡及次级卵泡均显著高于模型组,但仍低于对照组;颗粒细胞Caspase-3表达水平明显低于模型组;qPCR结果证实,实验组小鼠卵巢组织Caspase 3和Bax mRNA表达水平明显低于模型组,Western blot检测结果显示Caspase 3和Bax蛋白表达均下降,但3组间未达到统计学意义。获卵数、受精卵数、卵裂胚胎数和囊胚数均有所提高,但3组间受精率、卵裂率和囊胚形成率均无显著性差异。合笼后,对照组15只小鼠均产仔,模型组15只小鼠中4只产仔,实验组15只小鼠中11只产仔,且获得妊娠时间明显短于模型组。(3)子代小鼠体重呈逐渐增长趋势,第1周对照组体重显著高于其它两组,但之后至6周龄3组间均无显著性差异。Y迷宫实验和新物体识别实验结果显示3组间子代学习记忆能力未见明显差异。结论:(1)胞外囊泡可恢复化疗损伤卵巢早衰小鼠卵巢功能和生育能力。(2)其机制可能与抑制颗粒细胞凋亡有关。(3)胞外囊泡对子代生长发育及学习记忆能力未见明显不良影响。目的:探讨胞外囊泡恢复小鼠卵巢功能及生育力的作用时间及最佳给药方式,为临床应用提供参考。方法:实验动物分对照组、模型组和实验组,每组各40只雌性SPF级ICR小鼠。一次性腹腔注射环磷酰胺(200 mg/kg)和白消安(20 mg/kg)建立卵巢早衰小鼠模型,将小鼠随机分为单次给药组和重复给药组。单次给药组经尾静脉单次注射0.1 ml 150μg胞外囊泡至实验组小鼠体内,对照组与模型组注射0.1 ml PBS,分别于给药1周、2周、3周和4周后随机处死部分小鼠观察血清学及组织学变化,部分小鼠4周后行体外受精及合笼试验。重复给药组小鼠每周注射1次0.1 ml 150μg胞外囊泡至实验组体内,共4周,对照组与模型组重复注射0.1 ml PBS,4周后行体外受精及合笼试验。结果:(1)EVs给药时间对卵巢功能的影响:EVs单次给药后小鼠体重呈逐渐增长趋势,2周后明显高于模型组;实验组小鼠E2水平逐渐上升,但随时间延长,模型组小鼠E2水平也渐渐恢复,4周后3组间无显著性差异;给药后各时间段FSH水平均低于模型组,但波动较大,3周后3组间无显著性差异。实验组给药1周后卵巢重量显著增加,并持续至第4周;组织学结果显示,3周后始基卵泡、次级卵泡及窦卵泡均显著高于模型组,并持续至给药后4周,但未达对照组水平。(2)不同给药方式对小鼠生育力影响:两种给药方式的获卵数、受精卵数、卵裂胚胎数和囊胚数均无显著性差异;合笼结果显示,两种给药方式产仔数无显著性差异。结论:EVs单次给药和重复给药均可部分恢复小鼠卵巢功能及生育能力。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R711.75

【参考文献】