超高压液相色谱—串联质谱技术分析多囊卵巢综合征患者血清类固醇激素水平的研究

发布时间：2020-05-17 13:36

【摘要】：目的:建立超高压液相色谱-串联质谱技术(Ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)检测血清类固醇激素睾酮(Testosterone,T)、硫酸脱氢表雄酮(Dehydroepiandrosterone Sulfate,DHEA-S)、雄烯二酮(Androstenedione,AD)和17α-羟孕酮(17α-hydroxy progesterone,17α-OHP)的实验方法和性能验证方案。比较UPLC-MS/MS和化学发光免疫学技术(Chemiluminescence Immunoassay,CLIA)分别测定血清雄性激素水平高低与多囊卵巢综合征(Polycystic Ovarian Syndrome,PCOS)的临床诊断符合率。方法:研究对象选自上海市交通大学附属瑞金医院内分泌门诊和病房确诊的160例PCOS患者。PCOS诊断标准参照2003鹿特丹标准。另外选取146名瑞金医院正常女性志愿者作为对照组。参考美国临床和实验室标准化委员会(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)系列文件,对UPLC-MS/MS测定的血清T、DHEA-S、AD和17α-OHP的检测低限、精密度、分析测量范围、正常值参考范围和准确度等分析性能进行验证和评价。并从中选取100例受试者血清,将UPLC-MS/MS检测结果与不同检测系统如CLIA和放射免疫分析技术(Radioimmunoassay,RIA)进行方法学比较。在建立UPLC-MS/MS测定血清类固醇激素方法的基础上,采用UPLC-MS/MS和CLIA分别测定160例PCOS患者和146例正常对照组血清中的雄性激素--T和DHEA-S水平,并结合身体质量指数(Body Mass Index,BMI)等参数绘制受试者工作特征曲线(Receiver Operating Characteristic Curve,ROC Curve),计算曲线下面积(Area Under Curve,AUC),选择与临床特征最符合的测定方法为PCOS临床诊断服务。结果:UPLC-MS/MS检测类固醇激素的方法性能验证:(1)检测低限:T、DHEA-S、AD和17α-OHP的检测低限分别为0.02ng/ml、5ng/ml、0.02ng/ml和0.02ng/ml。(2)精密度:T批内和总精密度分别为4.86%-5.6%和5.53%-6.17%,DHEA-S批内和总精密度分别为2.58%-5.31%和2.88%-7.18%,AD批内和总精密度分别为4.81%-5.2%和4.55%-5.89%,17α-OHP批内和总精密度分别为3.66%-4.79%和3.58%-4.98%。(3)分析测量范围:T、DHEA-S、AD和17α-OHP的分析测量范围分别为0.02-100ng/ml、5-4000ng/ml、0.02-100ng/ml和0.02-100ng/ml。(4)正常值参考范围:T、DHEA-S、AD和17α-OHP的正常值参考范围分别为0.15-0.63 ng/ml、423-1929 ng/ml、0.94-4.25 ng/ml和0.03-2.73 ng/ml。(5)回收率:T、DHEA-S、AD和17α-OHP的回收率均在80%-120%范围内。(6)不同检测系统的比较:UPLC-MS/MS法和CLIA法的测定的结果呈极显著正相关,UPLC-MS/MS法和RIA法的测定的结果呈显著正相关。比较UPLC-MS/MS法和CLIA法测定雄性激素水平高低与PCOS的临床诊断符合率:(1)UPLC-MS/MS测定DHEA-S的AUC(0.789)明显优于CLIA测定DHEA-S的AUC(0.661),有显著统计学差异(P0.01);UPLC-MS/MS测定T的AUC(0.85)和CLIA测定T的AUC(0.805)无统计学差异(P=0.17)。(2)UPLC/MS-MS测定T及DHEA-S联合后的AUC(0.917)明显优于CLIA测定的AUC(0.808),有显著统计学差异(P0.001);也优于其单独测定T的AUC(P0.01)或DHEA-S的AUC(P0.001)。(3)UPLC/MS-MS测定T,DHEA-S及BMI联合后的AUC(0.942)明显优于CLIA测定的AUC(0.847),有极显著统计学差异(P0.001);也优于其两指标联合测定的AUC(P0.05)。结论:UPLC-MS/MS检测系统检测血清类固醇激素T、DHEA-S、AD和17α-OHP的分析性能符合临床要求,可用于临床样本的检测。UPLC-MS/MS检测法测定的雄性激素水平联合被测者的BMI对PCOS有更高的检出率,并具有一定的临床应用和推广价值。
【图文】：

图 1-5：T 的线性图Fig.1-5: Linearity of T图 1-6：DHEA-S 的线性图Fig.1-6: Linearity of DHEA-S

DHEA-S的线性图
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：O657.63;R711.75

【参考文献】

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本文编号：2668638