MicroRNA-210影响卵巢癌细胞的生长和放射治疗疗效研究

发布时间：2020-05-20 13:50

【摘要】：卵巢癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一,发病率和致死率极高,严重危害全世界女性的健康。Micro RNA(miRNA)是能通过解降m RNA或翻译抑制下调靶基因表达的一类非编码短序列RNA。近年来研究表明:miRNA表达水平与肿瘤的发生、发展和治疗密切相关。有文献报道:Micro RNA-210(miR-210)在卵巢癌细胞中异常高表达,且与卵巢癌的化疗耐药有关,但其与卵巢癌细胞的生长和放射治疗的相关性目前尚无相关报道。本课题对miR-210与卵巢癌细胞的生长和放射治疗的关系及其作用机制做了深入研究。目的:探讨miR-210在卵巢癌细胞生长过程中的作用及其与放射治疗敏感性的关系,阐明miR-210对卵巢癌发展和治疗的影响及可能的分子机制。方法:1.体外培养人卵巢癌细胞株OVCAR3和SKOV3。应用瞬时细胞转染法分别将miR-210 mimic和抗miR-210抑制剂转染至OVCAR3和SKOV3细胞中,并利用Real-time PCR法进行转染结果鉴定,从而获得miR-210过表达和低表达卵巢癌细胞模型。2.分别将OVCAR3和SKOV3两种卵巢癌细胞设立为对照组miR-210过表达模型组和miR-210低表达模型组,采用MTT法检测各组细胞的增殖活性,采用Transwell法检测各组细胞的迁移和侵袭能力。3.采用Western Blot法检测OVCAR3卵巢癌细胞的对照组miR-210过表达模型组和miR-210低表达模型组细胞增殖,迁移和侵袭的相关蛋白的表达变化。4.采用不同剂量(3050和100 Gy)电离辐射分别照射OVCAR3和SKOV3两种卵巢癌细胞的对照组和miR-210过表达模型组细胞,并采用MTT法检测各组细胞的增殖活性。5.采用Western Blot法分别检测OVCAR3和SKOV3两种卵巢癌细胞对照组和miR-210过表达模型组细胞经50Gy射线照射后,凋亡相关蛋白表达水平。6.采用不同剂量(510和20 Gy)电离辐射分别照射OVCAR3和SKOV3两种卵巢癌细胞的对照组和miR-210过表达模型组细胞,并采用Caspase-Glo?检测试剂盒检测各组细胞caspase 3/7酶的活性。结果:1.经瞬时细胞转染和Real-time PCR鉴定,成功建立OVCAR3和SKOV3两种卵巢癌细胞的miR-210过表达和miR-210低表达细胞模型。2.MTT结果显示:与对照组比较,miR-210过表达卵巢癌细胞组细胞增殖活性升高,miR-210低表达卵巢癌细胞组细胞增殖活性降低(P0.05);Transwell肿瘤细胞迁移和侵袭实验结果显示:与对照组比较,miR-210过表达卵巢癌细胞组细胞迁移和侵袭能力增强,miR-210低表达卵巢癌细胞组细胞迁移和侵袭能力减弱(P0.05)。说明miR-210可以促进卵巢癌细胞的增殖迁移和侵袭。3.Western Blot结果显示:与对照组比较,miR-210过表达的OVCAR3卵巢癌细胞PTENE-cadherin的表达水平明显下降,而P-AKTN-cadherinSnail和Vimentin的表达水平明显升高。相反,miR-210低表达的OVCAR3卵巢癌细胞PTENE-cadherin的表达水平明显升高,而P-AKTN-cadherinSnail和Vimentin的表达水平明显下降。说明miR-210可以激活卵巢癌细胞的AKT通路,调控EMT相关蛋白的表达。4.MTT结果显示:在给予电离辐射后,与对照组比较,过表达miR-210卵巢癌细胞组细胞增殖活性升高(P0.05)。说明miR-210降低了卵巢癌细胞对电离辐射的敏感性。5.Western Blot结果显示:与对照组比较,过表达miR-210的OVCAR3和SKOV3细胞给予50 Gy放射线照射后,两株细胞中BAX表达水平均明显下降,而BCL-2表达水平均明显升高。说明miR-210可以抑制电离辐射引起的细胞凋亡过程。6.Caspase-Glo?检测结果显示:在给予电离辐射后,与对照组比较,过表达miR-210卵巢癌细胞组细胞caspase 3/7酶的活性明显降低(P0.05),进一步说明了miR-210可以抑制电离辐射引起的细胞凋亡过程。结论:1.miR-210可通过激活AKT信号通路调控EMT相关蛋白表达促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。2.miR-210可通过抑制凋亡作用,降低卵巢癌细胞对放射治疗的敏感性,有望成为潜在的治疗卵巢肿瘤的新靶点。
【图文】：

靶基因,生物合成,功能,沉默复合体

图 1.1 microRNA的生物合成及功能miRNA 的功能：成熟的 miRNA 被加工合成后，立刻与 RNA 诱导的（RISC）相结合，，通过以下两种方式作用于靶基因：（1）以不完式与靶基因 mRNA 结合，抑制其翻译表达，减少相应蛋白质合成，

卵巢癌细胞,转染,表达水平,对照组

结果显示：与对照组比较，转染 miR-210mimic 后，OVCAR3 和 SKOV miR-210 表达水平明显升高，而 anti-miR-210 抑制剂则抑制了 OVCAV3 细胞中 miR-210 的表达(P<0.05)（图 3.1，表 3.1）。说明通过瞬时成功建立了 miR-210 过表达和低表达 miR-210 的 OVCAR3 和 SKOV3
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.31

【参考文献】