胎盘源性微囊泡所致血管痉挛的相关研究

发布时间：2020-05-22 06:10

【摘要】：目的:子痫前期(Preeclampsia,PE)是妊娠期常见的病理综合征,其发病机制尚不明确。全身小血管痉挛是其主要病理生理改变,本实验前期研究发现,子痫前期孕妇胎盘可产生并释放大量胎盘源性微囊泡(Placenta-dervied microvesicles,pcMVs)进入母体血液循环中,提示可能与子痫前期的血管痉挛所致母婴并发症有关。本研究采用机械法制造的C57BL/6J小鼠胎盘pcMVs,通过体内实验经鼠尾注射pcMVs,应用激光散斑观察其脑血流灌注量、体外血管环张力实验观察pcMVs对血管痉挛的作用以及注射pcMVs后孕鼠胚胎发育的影响,初步探索子痫前期发生血管痉挛的机制,为子痫前期发病机制的研究提供新的思路和依据。方法:(1)C57小鼠以雌雄比3:1进行合笼配对,在标准条件下饲养,并进行妊娠天数鉴定;(2)采用机械法制备C57孕鼠胎盘pcMVs,通过电镜、粒径测量和流式细胞仪计数鉴定;(3)体外血管环张力实验检测pcMVs对非孕小鼠离体动脉的血管痉挛作用;(4)体内实验通过激光散斑观察经鼠尾静脉注射pcMVs后对C57小鼠脑血流灌注量的影响;(5)在孕鼠妊娠第7天鼠尾静脉注射pcMVs连续1周,在孕15天收集孕鼠胎盘和胚胎,测量胎盘与胚胎大小重量,HE染色观察胎盘病理变化。结果:(1)通过透射电镜可观察到体外制备的pcMVs的完整结构,而粒径检测也表明pcMVs的直径是在100-700nm之间,流式细胞仪检测pcMVs表面AV特异抗体的表达为10.1%并可计算pcMVs的数量;(2)在非孕小鼠离体动脉环实验中,与对照组相比,pcMVs能够引起血管段的收缩反应(2.283±0.248mN VS 0.200±0.063mN,P值0.001);(3)鼠尾静脉注射pcMVs的17.2s±1.3s后,C57小鼠出现脑血流灌注量下降,注射前血流灌注量为352.342±33.564PU,而注射后血流灌注量为210.532±41.971PU,血流灌注量恢复为272.043±22.764PU;与正常组相比,注射pcMVs后,小鼠血流灌注量下降明显(40.70%±8.57%VS 1.18%±1.98%,P值0.001),随后血流又恢复,但无法恢复至正常水平(77.73%±8.89%VS 100%±1.39%,P值0.001);(4)与对照相比,妊娠小鼠注射pcMVs后胚胎数量减少(5.3个±1.2个VS 8.0个±0.9个,P值=0.001),孕鼠胎盘重量明显减轻(0.082±0.010g VS 0.058±0.013g,P值=0.004),胎鼠重量也明显减轻(0.267±0.034g VS 0.082±0.011g,P值0.001),小鼠胎盘直径明显缩短(0.827±0.046cm VS 0.633±0.064cm,P值0.001),且胎盘母体面边缘明显出血,迷路区域血流明显减少并有白细胞浸润。结论:(1)通过体内、体外实验发现,pcMVs能够引起血管痉挛的反应,并可引起非孕小鼠血流灌注量的下降,提示pcMVs所致血管痉挛可能与子痫前期发病有关;(2)体外制备的pcMVs可导致胎盘母体面结构的破坏,抑制胚胎的生长发育,研究提示pcMVs可能通过引起子宫胎盘血管痉挛导致子痫前期发生并影响胚胎发育。
【图文】：

图 1 体外制备的 pcMVs 的电子显微镜鉴定和粒径鉴定；A，pcMVs 的电子显镜鉴定（白色箭头）；B，pcMVs 的粒径鉴定（粒径范围为 100-700nm 之间）。1.2.2pcMVs 的流式细胞仪计数结果：在 FSC/SSC 散点图中，使用 Megamix 标准微球来圈定直径＜0.9um 的区域即图 2A 所框选中的 P1 区域均为直径＜0.9um 的 pcMVs 区域；使用 Spherote计数微球来框选中计数微球的位置，P2 区域即为计数微球的位置。在流式上后，图 2B 为 pcMVs 样本的阴性对照，而图 2C 为 Annexin V 抗体的 EDTA 同阴性对照。图 2C 中框选区域即则为样本中 pcMVs 的数量。根据前述公式即换算并稀释至合适浓度。

9图 2 体外制备的 pcMVs 的流式计数结果；A，Megamix 标准微球的框选设定，P1 框选的区域均是直径＜0.9um 的 pcMVs，P2 框选的区域均是计数微球；B，pcMVs 样本的阴性对照；C，Annexin V 的 EDTA 阴性对照；D，框选区域为 pcMVs。1.2.3 非孕雌鼠鼠尾静脉注射 pcMVs 后小鼠反应结果：在 pcMVs 浓度梯度实验（表 1）中：用 0.9×107个/ml 浓度通过鼠尾静脉注射 100ul 后，该组小鼠均立即出现死亡；而用 0.6×107个/ml 浓度通过鼠尾静脉注射 100ul 后，小鼠均立即出现抽搐痉挛的反应，但随后在 30min 内，，小鼠又逐渐恢复至正常状态；而用 0.3×107个/ml 浓度通过鼠尾静脉注射 100ul 后，小鼠基本没有任何反应。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R714.244

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本文编号：2675559