ADSCs联合雌激素对早发性卵巢功能不全患者调节性T细胞免疫调控作用的研究

发布时间：2020-05-29 09:08

【摘要】：研究目的:近年来研究表明,早发性卵巢功能不全(POI)与自身免疫失调有关,表现为外周血调节性T细胞(Treg)降低。不同来源的间充质干细胞(MSCs)应用于化疗性POI动物模型时,均显示有改善诱导POI的作用,但应用于免疫诱导的POI的研究甚少。也有研究显示雌激素(17β-E2)有促进Treg增殖并增强其免疫抑制活性的作用。本实验探讨了脂肪间充质干细胞(ADSCs)联合17β-E2对POI患者Treg的免疫调控作用。方法:第一章:原代培养ADSCs并进行流式鉴定及成脂成骨诱导。密度梯度离心法分离健康人及POI患者的PBMCs。在植物凝集素(PHA)的刺激下,将PBMCs分别与不同浓度ADSCs及17β-E2共培养72h,检测淋巴细胞增殖率和Foxp3、TGF-β1、IFN-y的mRNA水平以及Treg的比例。第二章:选择第一章中促Treg增殖效果最佳的1x1 05ADSCs以及10-9moI/L 17β-E2作为联合组,在PHA的刺激下将PBMCs分别与对照组、10-9mo1/L17β-E2组、1x105ADSCs组、联合组共培养72h,检测Foxp3、TGF-β1、IFN-γ的mRNA水平以及Treg的比例。结果:第一章:原代培养的ADSCs纯度高,活性好,表型稳定,高表达CD29、CD44、CD105,低表达CD34、CD45、人白细胞DR抗原(HLA-DR),具备成脂成骨分化能力。与对照组相比,不同浓度的ADSCs及17β-E2均能促进Treg的增殖,上调Foxp3、TGF-β1的表达,下调IFN-y的表达。第二章:与对照组相比,各实验组均能上调Foxp3、TGF-β1的mRNA水平,下调IFN-y的mRNA水平,及促进Treg表达,其中联合组的效果最佳。结论:第一章:ADSCs及17β-E2均能发挥免疫调节作用,诱导调节性T细胞生成,其中 1x1O5 ADSCs 和 10-9 mol/L 17β-E2 为最佳浓度。第二章:ADSCs及雌激素可以通过促进Foxp3的表达、TGF-βl的分泌及抑制IFN-y的分泌促进Treg增殖。ADSCs联合17β-E2能发挥协同作用,共同诱导Treg的免疫调节功能。
【图文】：

流式细胞术结果显示细胞高表达基质细胞的表面标志ＣＤ２９、ＣＤ４４和逡逑ＣＤ１０５，低表达造血干细胞表面标志ＣＤ３４、ＣＤ４５和成纤维细胞表面标志逡逑ＨＬＡ－ＤＲ，证实本实验所培养细胞符合干细胞的基本特征（图１－２）。成脂分化逡逑诱导后，胞质中出现大量脂滴，Ｏｉｌ邋ＲｅｄＯ阳性，，脂滴呈橘红色；成骨分化诱导逡逑经Ａｌｉｚａｒｉｎ邋Ｒｅｄ邋Ｓ染色后可见胞质中出现黑色的钙结节。证实为人脂肪间充质千逡逑细胞，可用于后续实验研宄（图１－３）。逡逑１６逡逑

ＣＤ４４邋ＦＩＴＣ－Ａ逦ＣＤ３４邋ＰＥ－Ａ逡逑图１－２邋ＡＤＳＣｓ的免疫表型鉴定逡逑Ｆｉｇ邋１－２邋Ｔｈｅ邋ｉｍｍｕｎｅ邋ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ邋ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ＡＤＳＣｓ逡逑
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R711.75

【参考文献】

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本文编号：2686713