miR-93在PCOS患者血清中的表达及临床意义

发布时间：2020-06-11 01:32

【摘要】：目的:多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是一种内分泌代谢疾病,主要特征是出现高雄激素血症、排卵障碍以及胰岛素抵抗。该症状最常见于育龄妇女,具体临床表现为月经稀发、闭经,婚后不孕,卵巢多囊样等。综合征发病时往往伴有肥胖、胰岛素抵抗、血脂异常等情况,同时作为2型糖尿病、心脑血管病及子宫内膜癌等疾病的高危诱因,一旦发病,将会对患者的正常生活产生非常严重的影响。然而,其详细的发病机制至今仍不十分清楚。微小RNA(microRNA,miRNA)是一类具有基因调控功能的小RNA分子,一般通过作用于靶基因mRNA的3′非翻译区(UTR)引起靶基因mRNA降解或翻译受阻,起到负调控作用。近年来,越来越多的研究表明,差异表达的miRNA与PCOS的发生发展过程密切相关。本研究通过检测PCOS患者血清中miR-93的表达量的变化,分析miR-93的变化与PCOS患者临床特征的关系,探讨miR-93在PCOS发生发展中的临床意义;随后又检测了miR-93对人卵巢颗粒样细胞系KGN细胞增殖的影响并鉴定了miR-93的直接靶基因,为进一步阐明PCOS可能的发病机制及其临床诊疗提供新依据和新思路。方法:收集2014年12月-2015年12月经病理确诊的多囊卵巢综合征患者血清25例为实验研究组,同时收集卵巢功能正常者血清25例为实验对照组。记录患者的年龄、身高、体重、性激素六项(包括卵泡生成激素、黄体生成激素、雌二醇、孕酮、睾酮和催乳素)、胰岛素、血糖等。采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)法分别检测两组患者血清中miR-93的相对表达量,并分析miR-93与多囊卵巢综合征临床特征(高雄激素血症、胰岛素抵抗等)的关系。通过绘制受试者工作特征曲线ROC,计算曲线下面积(AUC)来评价miR-93诊断PCOS的价值。利用MTT和克隆形成实验检测人卵巢颗粒样细胞系KGN细胞生长和增殖的变化;进一步利用生物信息学技术分析预测miR-93作用的靶基因,然后在人卵巢颗粒样细胞系KGN利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-93的直接靶基因。采用SPSS17.0软件对实验数据进行统计学分析,当P0.05时表明差异具有统计学意义。结果:通过对临床资料进行回顾性分析,在PCOS患者中,体重指数,黄体生成素、睾酮、胰岛素和血糖水平均明显高于卵巢功能正常对照者(P0.05)。与对照组相比,miR-93在多囊卵巢综合征患者血清中的相对表达量明显增加(Z=7.614,P0.01)。在对照组,miR-93的表达水平与睾酮、胰岛素水平、胰岛素抵抗指数的相关系数r值分别为0.03、0.42、0.39(P值分别为0.95、0.11、0.13);在实验组,miR-93的表达水平与睾酮、胰岛素水平、胰岛素抵抗指数的相关系数r值分别为0.33、0.24、0.28(P值分别为0.09、0.41、0.47)。ROC曲线分析显示,miR-93用于诊断多囊卵巢综合征的AUC(ROC曲线下面积)值为0.73,敏感度为70%,特异度为78%,95%置信区间为[0.59-0.87]。封闭miR-93的表达后,人卵巢颗粒样细胞系KGN细胞的生长增殖能力均明显降低;而过表达miR-93后,细胞的生长增殖能力均明显升高。荧光报告基因实验结果显示,miR-93能够识别并结合Ras相关蛋白基因(RAB5B)mRNA 3'UTR,抑制荧光素酶的活性;而对突变的RAB5B mRNA 3'UTR无作用。与对照组相比,在人卵巢颗粒样细胞系KGN细胞中转染miR-93 ASO后,RAB5B mRNA和蛋白水平均显著增高;而转染miR-93 mimics后,RAB5B mRNA和蛋白水平均显著降低。结论:1.miR-93在多囊卵巢综合征患者血清中异常高表达,且其表达水平与患者的胰岛素、睾酮水平无关。2.miR-93用于诊断多囊卵巢综合征准确度较高,可能对多囊卵巢综合征的诊断有一定价值。3.miR-93可促进人卵巢颗粒样细胞系KGN细胞的增殖。4.RAB5B是miR-93的直接靶基因并受其负调控。
【图文】：

图 1.1 miR-93 及 U6 snRNA 的溶解曲线1.2.3 实验组与对照组患者血清中 miR-93 的表达两组患者血清中均检测出 miR-93 的表达。如表（1.2）所示，与正常对照组相比，miR-93 在多囊卵巢综合征患者（PCOS 组）血清中的相对表达量明显升高（P < 0.01），差异具有统计学意义。表 1.2 两组患者血清中 miR-93 的相对表达量 M（P25, P75）项 目对照组（n=25）PCOS 组（n=25）Z PmiR-93 1.01(0.55,1.40) 2.70(2.10,3.15) 7.614 < 0.01P < 0.01 表示差异具有统计学意义1.2.4 两组患者血清中 miR-93 的表达水平与睾酮、胰岛素水平、胰岛素抵抗指数的相关性分析在正常对照组，miR-93 的表达水平与睾酮、胰岛素水平、胰岛素抵抗指数

数0.390.13 0.28 R-93 诊断 PCOS 的 ROC 曲线分析，又称为感受性曲线, 用于评价某种诊断指标的敏率（敏感度）为纵坐标，，假阳性率（1-特异度）为 曲线越靠近左上角和曲线下面积越大，诊断的准佳[18]。如图（1.2）所示，以每个临界点对应的假阳纵坐标，绘制ROC曲线，miR-93用于诊断PCOS的.05 相比（AUC=0.05 时提示无诊断价值），差异具依次从图（1.2）曲线上最左侧的点选择出正确诊断100％）最大的临界点，此时相对应的切点的真阳确诊断率最高。具体数值详见表 1.4 及图 1.2。表 1.4 血清 miR-93 的 ROC 曲线分析AUC 敏感度 (%) 特异度 (%) 0.73 70 78
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R711.75

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本文编号：2707180