游离脂肪酸抑制KLF4在肥胖相关子宫内膜癌中作用及机制研究

发布时间：2020-06-21 20:10

【摘要】：目的本研究在体外培养子宫内膜癌细胞Ishikawa的基础上,明确高水平棕榈酸(Palmic Acid,PA)是否通过DNMT1/3b抑制KLF4表达,从而促进子宫内膜癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,并探讨其可能的分子机制,为临床寻找治疗肥胖相关子宫内膜癌发生、发展的分子靶标,提供理论依据。方法(1)体外培养子宫内膜癌细胞Ishikawa,分别用20μM及50μM PA作用于癌细胞。(2)转染过表达质粒或si RNA,分别上/下调KLF4、DNMT1和DNMT3b,q RT-PCR和Western Blot技术检测DNMT1、DNMT3b、KLF4、P53、Ki67以及MMP2的m RNA和蛋白表达水平。(3)运用CCK-8、Transwell及划痕实验,检测对Ishikawa细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。(4)应用SPSS 17.0软件对数据分析。数据分析采用数据正态分布使用t检验和数据非正态分布使用秩和检验,多组间相互比较通常采用单因素方差分析。P0.05认为有统计学意义。结果1.PA可影响KLF4及相关基因的表达,并导致子宫内膜癌细胞的生物学行为发生变化(1)20μM、50μM PA分别作用于Ishikawa细胞24小时后,20μM组结果显示,与对照组相比,KLF4 m RNA表达水平显著降低(P0.05),Ki67、MMP2 m RNA表达水平显著升高(P0.05)。50μM组结果显示,与对照组相比,KLF4和P53的m RNA及蛋白表达水平均显著降低(P0.05),Ki67及MMP2的m RNA及蛋白表达水平均显著升高(P0.05)。(2)20μM、50μM PA分别作用于Ishikawa细胞24和48小时后,与对照组相比,细胞的侵袭和迁移能力均显著升高(P0.05),但对细胞的增殖能力无显著影响(P0.05)。2.KLF4可影响下游相关基因的表达,并导致子宫内膜癌细胞的生物学行为发生变化(1)上调KLF4 24 h后,Ki67、MMP2 m RNA及蛋白表达水平均显著低于对照组(P0.05),上调KLF4 24和48 h后,Ishikawa细胞的增殖、侵袭和迁移能力均显著低于对照组(P0.05)。(2)下调KLF4 24 h后,与对照组相比,P53 m RNA及蛋白表达水平均显著降低(P0.05),Ki67、MMP2 m RNA及蛋白表达水平均显著升高(P0.05);下调KLF4 24和48 h后,与对照组相比,Ishikawa细胞的侵袭和迁移能力均显著升高(P0.05)。3.PA通过抑制子宫内膜癌细胞KLF4及下游基因的表达,导致细胞生物学行为的变化(1)50μM PA作用于子宫内膜癌细胞Ishikawa的同时,上调KLF4 24 h后,与对照组相比,P53 m RNA表达水平显著升高(P0.05),Ki67、MMP2 m RNA及蛋白表达水平均显著降低(P0.05)。(2)50μM PA作用于子宫内膜癌细胞Ishikawa的同时,上调KLF4 24和48 h后,与对照组相比,Ishikawa细胞的增殖、侵袭和迁移能力均显著降低(P0.05)。4.PA通过上调甲基转移酶(DNMT1/3b)抑制KLF4表达(1)子宫内膜癌患者癌组织中DNMT1、DNMT3b的m RNA及蛋白表达水平均显著高于非癌个体子宫内膜组织(P0.05)。(2)20μM、50μM PA作用于Ishikawa细胞24小时后,与对照组相比,DNMT1、DNMT3b m RNA及蛋白表达水平均显著升高(P0.05)。(3)下调子宫内膜癌细胞Ishikawa DNMT1/3b表达24 h后,与对照组相比,KLF4 m RNA及蛋白表达水平均显著升高(P0.05)。(4)50μM PA作用于子宫内膜癌细胞Ishikawa的同时,下调DNMT1/3b 24 h后,与对照组相比,KLF4 m RNA及蛋白表达水平均显著升高(P0.05)。结论1.PA可能通过抑制KLF4的表达,导致下游相关癌基因、抑癌基因的表达紊乱,最终促进了子宫内膜癌细胞Ishikawa的增殖、侵袭和迁移能力。2.PA可能通过促进DNA甲基转移酶DNMT1/3b的表达,抑制子宫内膜癌细胞Ishikawa KLF4的表达。
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R737.33
【图文】：

不同浓度PA作用于Ishikawa细胞24h、48h、72h、96h后，CCK-8检测活细胞数目

游离脂肪酸抑制KLF4在肥胖相关子宫内膜癌中作用及机制研究

不同浓度PA刺激Ishikawa细胞24h后，KLF4、P53、Ki67、MMP2表达水平

【参考文献】