孕激素、LY294002调节FOXO1表达对不同PR卵巢癌细胞增殖、凋亡的作用机制

发布时间：2020-06-23 18:47

【摘要】：目的:探讨孕激素(Progesterone,P)及磷脂酰肌醇-3-激酶(Phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B,PKB/AKT)抑制剂LY294002单独及联合干预下调节FOXO1表达对不同孕激素受体(Progesterone receptor,PR)卵巢癌细胞增殖、凋亡的作用机制,为卵巢癌激素治疗及靶向治疗提供理论依据。方法:选取生长良好的卵巢癌细胞株HO-8910(PR高表达)、SKOV3(PR低表达)作为研究对象。1.CCK-8法分别检测不同浓度P(0、12.5、25、50、100μmol/L)及LY(0、5、10、20、40μmol/L)单独作用24h、48h、72h对两株细胞的增殖影响。2.取生长良好的两株细胞均分4组:对照组(0μmol/L)、实验组:P组(25μmol/L)、P+LY组(25+20μmol/L)、LY组(20μmol/L),对照组加入等量不含药物的培养液。干预24h行相关实验检测:(1)CCK-8法检测两株细胞的增殖情况;(2)倒置显微镜观察两株细胞生长形态改变;(3)Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测两株细胞的凋亡情况;(4)免疫印迹法(Western Blot)检测各组中p-AKTSer473、p-FOXO1Ser256、FOXO1、PR-A、PR-B蛋白的表达情况。结果:1.CCK-8检测两株细胞增殖情况:(1)不同浓度P作用:除外12.5μmol/L的P作用24h,与对照组SKOV3细胞存活率相比无明显差异(P0.05),其余各实验组与对照组及各实验组间细胞存活率相比均有差异(P0.05)。12.5-100μmol/L的P对HO-8910细胞抑制增殖作用显著高于SKOV3细胞且细胞存活率呈剂量-效应与时间-效应依赖性降低。(2)不同浓度LY干预:除外5μmol/L的LY作用24h、48h对两株细胞抑制增殖能力无明显差异(P0.05),其余各实验组与对照组及各实验组间细胞存活率相比均有差异(P0.05)。5-40μmol/L的LY对HO-8910、SKOV3细胞抑制增殖作用相似且细胞存活率呈剂量-效应与时间-效应依赖性下降。(3)P(25μmol/L)及LY(20μmol/L)联合作用24h,HO-8910、SKOV3细胞存活率分别为45.95±1.70%、72.23±2.08%。与药物单独作用相比,均为P+LY组抑制增殖效果最显著(P0.05),且对HO-8910细胞抑制增殖作用较SKOV3细胞明显。2.倒置显微镜观察两株细胞形态学改变:对照组HO-8910、SKOV3呈上皮样细胞生长,类圆形、梭形、铺路石样排列紧凑贴壁生长,细胞边界清晰。实验组HO-8910细胞间隙增大并可见细胞碎片,细胞粘附性变差,贴壁细胞减少,悬浮细胞增多,细胞呈长梭形不规则改变,且镜下P+LY组形态变化最显著;SKOV3细胞P组形态变化不显著,P+LY组与LY组细胞间隙增大,部分细胞呈多角形,界限不清有融合现象,未见明显漂浮细胞。3.两株细胞凋亡情况:(1)与对照组相比,各实验组凋亡率均增加(P0.05);(2)与药物的单独作用相比,均为P+LY组凋亡率最高(P0.05);(3)P组及P+LY组对HO-8910促凋亡作用较SKOV3显著增高,两者凋亡率相比(P0.05);(4)LY组对两株细胞诱导凋亡作用相比,差异无统计学意义(P0.05)。4.两株细胞Western Blot结果显示:(1)与对照组相比,各实验组p-AKTSer473、p-FOXO1Ser256表达降低,FOXO1表达增加,且均为P+LY组p-AKTSer473、p-FOXO1Ser256降低最显著,FOXO1增加最明显;(2)P组及P+LY组作用下,对HO-8910降低p-AKTSer473、p-FOXO1Ser256,上调FOXO1能力较SKOV3显著,两者蛋白表达相比(P0.05);(3)而LY组一定时间及浓度下,对两细胞株p-AKTSer473、p-FOXO1Ser256、FOXO1表达无显著差异(P0.05);(4)虽然药物干预后与对照组PR-B、PR-A表达相比无明显差异(P0.05),但两细胞株间PR-B、PR-A表达相比(P0.05),对两细胞株PR-B/PR-A比值进一步分析,显示HO-8910细胞PR-B在PR中所占比例较SKOV3细胞增加显著(P0.05)。结论:1.孕激素可能主要通过PR-B介导下调PI3K/AKT活性,促进FOXO1的表达,从而影响HO-8910、SKOV3卵巢癌细胞的增殖、凋亡。2.LY294002对抑制PI3K/AKT活化,其上调FOXO1的作用机制可能与PR表达水平无关。3.孕激素及LY294002联合应用对卵巢癌HO-8910、SKOV3细胞抑制增殖、诱导凋亡具有协同作用。
【学位授予单位】：遵义医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R737.31
【图文】：

存活率曲线,细胞存活率,时间-效应,对照组

与对照组相比，细胞活性显著降低且细胞增殖活性呈时间-效应、剂量-效应依赖性降低关系。（见表 1，图1）对于 SKOV3 细胞，12.5μmol/L 的 P 作用 24h 后，与对照组细胞存活率相比，差异不明显（P>0.05），随着作用时间 48h、72h 延长，与对照组细胞存活率相比（P<0.05）。其余各组细胞存活率比较均有显著差异，增殖活性具有时间-效应与剂量-效应依赖性降低趋势。（见表 2，图 2）一定时间及浓度作用下，P 对 HO-8910 细胞抑制增殖作用显著强于 SKOV3 细胞。我们将采用 25μmol/L 的 P 作用时间为 24h 用于后续实验研究。表 1 不同浓度的 P 作用 24 h、48 h、72 h 后 HO-8910 细胞的存活率（ x ±s

细胞存活率曲线

图 2 不同浓度 P 作用 24 h、48 h、72 h 后 SKOV3 细胞存活率曲线3.12 CCK-8 检测不同浓度 LY 对 HO-8910、SKOV3 细胞增殖活性的影响对于 HO-8910、SKOV3 细胞，LY 干预下各实验组细胞存活率与未给药组相比，细胞增殖活性均受到抑制（P<0.05）；相同浓度 LY 分别作用 24h、48h、72h 的各时间段实验组存活率比较，除外 5μmol/L 的 LY 作用 24h、48h 对两株细胞抑制增殖能力无明显差异（P>0.05），其余各组均有显著差异；相同时间以不同浓度 LY 作用后各浓度组存活率比较（P<0.05）。当 LY 在 5-40μmol/L 干预下，对两株细胞增殖活性具有剂量-效应与时间-效应依赖性降低关系。（见表 3-4，图 3-4）但总体来说，不同浓度 LY 干预下对 HO-8910、SKOV3 细胞抑制增殖作用相似。我们将采用 20μmol/L 的 LY 作用时间为 24h 用于后续实验研究。

【相似文献】