孕早期人巨细胞病毒感染对仔鼠海马糖皮质激素受体和盐皮质激素受体蛋白表达的影响

发布时间：2020-06-29 06:40

【摘要】：目的:人类巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)是宫内感染最常见的病毒,婴幼儿期中重度智力障碍,是以HCMV为代表的TORCH系列宫内感染为首要病因。海马是学习记忆的关键生理学基础,也是人巨细胞病毒作用的主要靶区,为了研究人巨细胞病毒导致子代学习记忆功能逐步下降的机制,本研究拟采用病理组织学和分子机制,探讨孕早期人巨细胞病毒感染对仔鼠海马海马糖皮质激素受体和盐皮质激素受体蛋白表达的影响,为HCMV宫内感染致子代子代学习记忆功能逐步下降供新的治疗靶点。方法:取9-10周龄SPF级SD鼠30只(雌鼠20只,雄鼠10只),按雌雄1:1合笼交配(雄鼠可多次进行交配),将孕鼠随机分成对照组(10只)和实验组(10只),分别于妊娠第5天腹腔内注射5×10~7 L~(-1)半数组织培养感染量(TCID_(50))HCMV悬液0.8 mL和等量的人胚成纤维细胞上清液0.8ml。分别从每组随机抽取10只15日龄仔鼠,(1)采用Morris水迷宫实验测试其学习记忆功能;(2)仔鼠经4%多聚甲醛灌注后取脑组织,采用病理组织学HE染色观察仔鼠海马形态学变化;(3)应用间接免疫荧光染色方法检测仔鼠海马(CA1区、CA3区)MR、GR蛋白的表达情况。采用SPSS 16.0软件进行统计学处理。结果:1.Morris水迷宫实验,在定位航行实验中,对照组和实验组仔鼠的逃避潜伏期均呈逐渐降低的趋势,实验组的逃避潜伏期均比对照组的时间长,并于第4天(t=-2.212,P0.05)、第5天(t=-2.827,P0.05)实验组较对照组差异有统计学意义。在空间探索实验中,实验组仔鼠在目标象限停留时间(探索正确时间)少于对照组,差异有统计学意义(t=2.390,PO.05);实验组穿越平台次数少于对照组,差异有统计学意义(t=2.477,PO.05)。2.仔鼠海马区CA1区、CA3区病理组织学HE染色显示,对照组仔鼠海马神经细胞排列均匀整齐,细胞核呈圆形或椭圆形,核仁明显,染色质均匀;实验组仔鼠海马神经细胞排列紊乱,数目减少,细胞水肿变大,部分细胞核固缩明显,并可见巨细胞变;3.免疫荧光染色结果显示,实验组仔鼠海马CA1区GR(t=3.05,P0.05)、MR(t=2.23,P0.05)、GR/MR(t=2.24,P0.05)平均吸光度值较对照组低,差异有统计学意义;实验组海马CA3区GR(t=2.76,P0.05)、MR(t=2.67,P0.05)、GR/MR(t=2.43,P0.05)平均吸光度值较对照组低,差异有统计学意义。结论:孕早期人巨细胞病毒感染可导致仔鼠空间学习记忆能力下降,海马CA1、CA3区海马神经细胞损伤,神经细胞水肿、减少,细胞核固缩明显,部分细胞呈巨细胞变;大鼠海马表面CA1、CA3区核受体GR、MR蛋白表达水平下降,以及GR/MR比值下降,HPA轴功能紊乱。海马MR、GR蛋白水平下调可能是孕早期HCMV感染致仔鼠空间学习记忆功能受损的机制之一。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R714.2

【参考文献】