FGF8在卵巢癌中的表达及临床价值

发布时间：2020-07-02 15:45

【摘要】：背景与目的卵巢癌(Ovarian Cancer,OC)是临床上常见的妇科恶性肿瘤,同时也是致死率最高的女性相关恶性肿瘤之一。卵巢癌发病隐匿,缺乏典型的早期临床症状以及有效的筛查手段,当患者出现腹胀、腹痛或发现盆腔肿物就诊时,60%-70%患者已被诊断为中晚期。目前卵巢癌的诊断主要借助于影像学检查和肿瘤标记物的检测,但其特异性和敏感性较低。随着诊疗手段的不断提高,卵巢癌的治疗主要以手术治疗联合化疗为主。早期卵巢癌患者可行全面分期手术,晚期卵巢癌患者术前可在铂类为基础的新辅助化疗下行肿瘤细胞减灭术,或行肿瘤细胞减灭术后给予足量、足疗程、规范的以铂类为基础的联合化疗。成纤维细胞生成因子8(firbroblast growth factor 8,FGF8)是成纤维生长因子家族(FGFs)的成员之一,在人类原肠胚时期参与细胞早期分化过程,是胚胎发育中不可缺少的的生长因子之一。目前相关研究发现FGF8在正常成人组织中呈无表达或低表达状态,但在某些激素依赖性肿瘤(如前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌)中FGF8呈过表达。为了进一步研究FGF8对卵巢癌发生发展的影响,我们收集了87例来自郑州大学附属郑州中心医院卵巢切除患者的组织标本。通过免疫组织化学染色法检测FGF8在上皮性卵巢癌、良性卵巢肿瘤以及正常卵巢组织中的表达情况,并分析FGF8在卵巢癌组织中的表达水平与患者年龄、临床分期、组织分级、组织类型、淋巴结转移及患者有无腹水之间的关系。然后通过慢病毒介导FGF8过表达,旨在探讨FGF8对卵巢癌细胞体外迁移能力的影响。方法1.选取2012年01月至2018年12月在郑州大学附属郑州中心医院住院手术患者术后卵巢组织石蜡标本,共87例,包括上皮性卵巢癌47例,良性卵巢肿瘤25例,正常卵巢组织15例,卵巢癌患者年龄介于24-82岁之间,平均年龄53.67岁。按照国际妇产科联盟(FIGO)标准手术病理分期:I-II期19例,III-IV期28例;组织类型:浆液性癌32例,黏液性癌7例,子宫内膜样癌6例,透明细胞癌2例;组织学分级:中-高分化9例,低分化38例;无腹水者15例,有腹水者32例;术后证实有淋巴结转移者15例,无淋巴结转移者32例。利用免疫组织化学染色法检测FGF8在三种不同卵巢组织中的表达情况,并分析FGF8的表达水平与临床各病理参数之间的关系。2.构建FGF8过表达慢病毒载体,包装慢病毒颗粒HBLV-h-FGF8-3xflagGFP-PURO,实验组感染卵巢癌细胞SKOV-3及OVCAR-8,使SKOV-3及OVCAR-8过表达FGF8,并设置未处理的空白组和感染HBLV-GFP-PURO的阴性对照组,采用Western blot技术检测卵巢癌细胞内FGF8蛋白的表达水平,进一步通过细胞划痕实验了解FGF8对卵巢癌细胞迁移能力的影响。3.相关数据分析采用SPSS 20.0版软件进行处理,组别之间的比较采用卡方检验和单因素方差分析,进一步组间两两比较采用LSD-t检验,P0.05表示差异有统计学意义。结果1.FGF8在上皮性卵巢癌组的表达明显高于良性卵巢肿瘤与正常卵巢组织组,差异具有统计学意义(P0.05),而良性卵巢肿瘤与正常卵巢组织之间差异无统计学意义(P0.05)。且FGF8在上皮性卵巢癌组织中的表达水平与患者的临床病理分期、淋巴结转移均有统计学差异(P0.05),与患者年龄、组织分级、组织类型、有无腹水无统计差异(P0.05)。2.慢病毒感染卵巢癌细胞SKOV-3及OVCAR-8,Western blot结果显示实验组FGF8蛋白高表达。细胞划痕实验结果显示过表达FGF8的SKOV-3及OVCAR-8实验组细胞迁移能力均高于相应的空白组及阴性对照组(P0.05),而空白组与阴性对照组细胞迁移能力无明显差异(P0.05)。结论1.FGF8在上皮性卵巢癌组织中高表达,并与卵巢癌的临床分期、淋巴结转移相关。2.FGF8促进了卵巢癌细胞的体外迁移能力。
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R737.31
【图文】：

癌组织,免疫组化检测,细胞浆,免疫组织化学染色

1.1 免疫组织化学染色结果光学显微镜400倍数下观察切片，免疫组织化学染色结果显示，FGF8在细胞浆内表达。图3.1所示：根据染色强度及染色百分比情况，A代表FGF8在上皮性卵巢癌组织中表达阴性（-），可见其细胞浆及细胞核均为蓝色；B代表FGF8在上皮性卵巢癌组织中表达阳性（+），可见其细胞浆染色为褐色，细胞核为蓝色。图 3.1 免疫组化检测 FGF8 在上皮性卵巢癌组织中的表达情况（400×）1.2 FGF8 在上皮性卵巢癌、卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织中表达情况FGF8在上皮性卵巢癌组织中的阳性表达率为63.83%，在良性卵巢肿瘤组织中的阳性表达率为28.00%，在正常卵巢组织中的阳性表达率13.33%，可见FGF8在上皮性卵巢癌组织中的阳性表达率明显高于良性肿瘤组及正常卵巢组，且上皮性卵巢癌组与良性卵巢肿瘤组及正常卵巢组两两比较均有统计学差异（P<0.05）

慢病毒感染,显色,荧光显微镜,荧光

具体见图3.2。图 3.2：荧光显微镜下观察慢病毒感染细胞后荧光显色情况（100×）注：A: SKOV-3 阴性对照组白光（感染 HBLV-GFP-PURO）；B: SKOV-3 阴性对照组荧光显色（感染 HBLV-GFP-PURO ）； C: SKOV-3 实验组白光（感染HBLV-h-FGF8-3xflag-GFP-PURO）; D: SKOV-3实验组荧光显色（感染HBLV-h-FGF8-3xflag-GFP-PURO）; E: OVCAR-8 阴性对照组白光（感染 HBLV-GFP-PURO）；F：OVCAR-8 阴性对照组荧光显色（感染 HBLV-GFP-PURO）；G: OVCAR-8 实验组白光（感染HBLV-h-FGF8-3xflag-GFP-PURO ）； H: OVCAR-8 实验组组荧光显色（感染HBLV-GFP-PURO）3 慢病毒感染卵巢癌细胞后 FGF8 蛋白检测结果过表达慢病毒感染卵巢癌SKOV-3及OVCAR-8细胞后，通过Western blot检测感染细胞内FGF8的表达情况。将SKOV-3及OVCAR-8细胞分别设置空白组、阴性对照组和实验组。由于FGF8是一种分泌型蛋白，我们通过检测位于慢病毒载体下游的flag蛋白间接检测FGF8蛋白的表达水平（图3.3、3.4）。实验结果显示过表达慢病毒感染后，实验组SKOV-3及OVCAR-8细胞内的flag蛋白的表达水平明显高于空白组和阴性对照组。组间比较采用单因素方差分析：对于SKOV-3细胞，F= 64.091，P=0.000，各组间实验结果比较采用LSD-t法检验，实验组flag

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