GPER特异性拮抗剂G15对子宫内膜癌侵袭迁移的影响及作用机制

发布时间：2020-07-03 03:37

【摘要】：目的:应用GPER特异性拮抗剂G15作用于ER阳性的Ishikawa细胞、ER弱阳性的HEC-1A及ER阴性的KLE细胞三种子宫内膜癌细胞系,探讨其对各种子宫内膜癌细胞侵袭迁移的影响及细胞相关侵袭迁移蛋白水平的变化。方法:基于前期实验,本课题组前期实验证实G15对ER表达弱阳性及阴性的子宫内膜癌的增殖有显著的抑制作用。本实验阶段主要关注肿瘤的侵袭和迁移。1细胞培育:子宫内膜癌细胞株Ishikawa和HEC-1A以含有10%胎牛血清的DMEM培养基培养;KLE细胞株,以含有10%胎牛血清的DMEM-F12培养基培养。2划痕愈合试验检测不同浓度G15作用不同时间后三种细胞迁移能力的变化。3 Transwell迁移侵袭实验检测不同浓度G15作用24h时间后三种细胞侵袭和迁移能力的变化。4 Western Blot方法检测检测三种子宫内膜癌细胞中GPER、MMP9及ERK蛋白表达水平的变化。结果:1.划痕愈合实验显示:G15对E2作用下的HEC-1A、KLE细胞迁移能力的抑制作用随浓度的增加,时间的延长而逐渐增大,而G15对E2作用下的Ishikawa细胞迁移能力的抑制作用较低。2.Transwell实验小室:E2促进三种子宫内膜癌侵袭及迁移能力增强,在HEC-1A和KLE细胞中,在不同浓度G15(0mol/L、10~(-9)mol/L、10~(-7)mol/L、10~(-5)mol/L)作用下,迁移能力依次降低,差异有统计学意义(P0.05)。而在Ishikawa中,迁移抑制能力较低,差异有统计学意义(P0.05)。3.Western Blot方法检测GPER特异性拮抗剂G15对E2作用下的三种细胞中GPER、ERK、MMP9蛋白表达的影响。用E2(10~(-6)mol/L)、E2(10~(-6)mol/L)+G15(10~(-5)mol/L)分别处理三种细胞48h。结果显示:GPER、ERK、MMP9蛋白在三种细胞中均有表达。在HEC-1A、KLE细胞中,相较对照组,E2可以上调GPER、ERK、MMP9蛋白的表达。G15可以显著抑制E2引起的HEC-1A、KLE细胞中GPER、ERK、MMP9蛋白的上调。而在Ishikawa细胞中,G15只能下调GPER的表达,而对ERK、MMP9蛋白的表达无影响,差异有统计学意义(P0.05)。结论:1.E2通过活化膜性雌激素受体GPER促进细胞侵袭及迁移,且在HEC-1A及KLE细胞中,即II型子宫内膜癌细胞中作用明显。2.G15对E2作用下的三种细胞的迁移能力均有抑制作用,且对HEC-1A和KLE细胞迁移能力的抑制作用呈剂量-时间依赖关系。3.在II型子宫内膜癌中,GPER特异性拮抗剂G15能够明显抑制GPER介导的GPER/ERK/MMP9信号通路。因此,GPER特异性拮抗剂G15有可能成为治疗II型子宫内膜癌的新靶向药物。
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.33
【图文】：

划痕愈合实验模型

48h48hE2+G15(10-5mol/L)0h E2+G15(10-7mol/L)0h E2+G15(10-9mol/L)0h48h 48h 48h

【参考文献】

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3 方伟岗;;肿瘤细胞与微环境的相互作用决定肿瘤转移的最终归宿[J];前沿科学;2011年03期

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本文编号：2739124