不同药物对大鼠子宫内膜异位症模型Leptin、Stat3和Caspase3的影响

发布时间：2017-03-29 08:18

  本文关键词：不同药物对大鼠子宫内膜异位症模型Leptin、Stat3和Caspase3的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：子宫内膜异位症(endometriosis, EMS)也称内异症,是一种雌激素依赖性妇科常见病,其生物学特征随着女性体内激素周期性改变而变化。临床症状主要包括：盆腔痛,盆腔包块、不孕等表现。EMS具有转移、侵袭、粘附、血管形成、凋亡减少等类似恶性肿瘤细胞的特征,也被称为“良性癌”。我们前期的研究发现,瘦素(leptin)、瘦素受体(leptin receptor, OB-R)和stat3在EMS异位内膜上均有表达,提示leptin有可能通过与OB-R结合,激活JAK2/stat3途径,促进EMS病灶的增殖,同时伴随着局部能量代谢的异常。此外caspase3作为调控细胞凋亡的关键分子,在EMS异位内膜细胞的凋亡中扮演着举足轻重的角色。辛伐他汀(simvastatin)属于他汀类药物,主要通过抑制胆固醇的合成,降低低密度脂蛋白,增加高密度脂蛋白,从而达到降胆固醇的作用。还可通过多条信号通路作用于全身多个脏器,发挥其调节机体代谢、抗肿瘤、抗炎、抗凋亡、预防缺血再灌注损伤等多方面效应。二甲双胍(metformin)既往主要用于治疗2型糖尿病。然而近年来越来越多的文献证明：二甲双胍可通过不同的机制发挥重要的抗肿瘤作用。既然EMS具有能量代谢异常、凋亡降低等特点,那么辛伐他汀和二甲双胍这两种既可改善机体能量代谢,又可通过多种途径促进细胞凋亡的药物,是否可以用来治疗EMS呢!本实验从EMS病灶的能量代谢和细胞凋亡异常着手,尝试从新的角度,研究EMS的发病机制，为EMS的药物治疗提供新的靶点。目的1、建立Lewis大鼠同种异体腹腔移植EMS模型。2、观察葛根素、辛伐他汀、二甲双胍和米非司酮对大鼠EMS病灶的影响。3、探讨四种药物是否对EMS病灶中Leptin及其下游分子stat3产生作用。4、通过观察四种药物对EMS病灶caspase3的影响,探讨其对EMS病灶细胞凋亡的影响。方法1、选择健康雌性Lewis大鼠,共70只,其中供体组9只,实验组61只,建立大鼠同种异体EMS模型,每日给予苯甲酸雌二醇0.05mg/100g,月几注，，共4周。2、观察大鼠EMS病灶的体积,筛选建模成功的大鼠,计算建模成功率。3、随机选择50只EMS大鼠,分为五组：1)对照组;2)葛根素组(50mg/kg);3)辛伐他汀组(5mg/kg);4)甲双胍组(126mg/kg);5)米非司酮组(6.33mg/kg),每组各10只。每组分别给相应的药。继续每日苯甲酸雌二醇0.05mg/100g,肌注,饲养4周。4、处死大鼠,再次观察病灶体积,取出病灶,待下一步实验。5、免疫组化(IHC)、实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测leptin、Stat3、Caspase-3;结果1、53只大鼠建模成功,成功率86.9%,每个病灶平均体积为27.01±3.72mm3。2、二甲双胍组和米非司酮组的病灶体积小于对照组,葛根素组病灶体积大于对照组,差异具有统计学意义;辛伐他汀组病灶体积与对照组相比无明显差异。3、冰冻切片IHC示：①葛根素组leptin的表达与对照组无明显差异;其他三组Leptin的表达均低于对照组;②辛伐他汀组Stat3的表达低于对照组;葛根素组Stat3的表达与对照组无明显差异;二甲双胍组和米非司酮组的Stat3的表达均高于于对照组。③葛根素组caspase3的表达与对照组相比无明显差异;辛伐他汀组caspase3的表达均低于对照组;二甲双胍组和米非司酮组caspase3的表达均高于于对照组。4、RT-PCR显示：①四组实验组Leptin mRNA的表达均低于对照组;②葛根素组和辛伐他汀组Stat3 mRNA的表达低于对照组;二甲双胍组和米非司酮组Stat3 mRNA的表达高于对照组；③葛根素组caspase3 mRNA表达与对照组无明显差异;其他三组实验组Leptin mRNA的表达均低于对照组。5、Western-blot示：①辛伐他汀组Leptin含量低于对照组;二甲双胍组和米非司酮组Leptin含量的表达高于对照组;葛根素组Leptin含量与对照组无差异;②四实验组stat3蛋白含量均低于对照组：③葛根素组caspase3含量低于对照组;其他三组caspase3蛋白含量的表达高于对照组。结 论1、Lewis大鼠同种异体腹腔移植EMS模型,成活率高,易观察,大鼠生存能力强,可接受多次手术,具有完整的免疫系统,在很大程度上与人EMS的组织和生化特征相一致。2、葛根素可降低EMS异位内膜中Leptin、Stat3、caspase3 mRNA表达和caspase3蛋白的含量，Leptin、Stat3蛋白的含量增加,可能是刺激了leptin、 stat3途径,同时抑制了EMS异位内膜细胞的凋亡,不适用于EMS的治疗。3、辛伐他汀未抑制病灶生长,但病灶中leptin、stat3、caspase3 mRNA和蛋白含量均下降。因此,需进一步实验探讨辛伐他汀是否可用于治疗EMS。4、二甲双胍不能通过leptin、OB-R、tat3信号通路,而可能是通过caspase3诱导细胞凋亡来抑制EMS病灶的生长。二甲双胍有望成为新的EMS治疗药物。5、米非司酮可通过caspase3诱导细胞凋亡来抑制EMS病灶的生长。6、Leptin可用于EMS的诊断,但不能用于判定疗效,无法成为EMS的参考检测指标。7、通过对EMS能量代谢和凋亡的研究,有助于明确EMS细胞的增殖和死亡,明确新的治疗理念,探索新的治疗药物。
【关键词】：子宫内膜异位症 瘦素 stat3 caspase3 辛伐他汀 二甲双胍 葛根素 米非司酮
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R-332;R711.71
【目录】：

• 中英文缩略词表5-6
• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-15
• 第一部分 Lewis大鼠子宫内膜异位症同种异体移植模型的建立15-21
• 实验材料15
• 实验方法15-16
• 实验结果16-18
• 讨论18-19
• 参考文献19-21
• 第二部分 不同药物对大鼠子宫内膜异位症模型leptin、Stat3和Caspase3的影响21-57
• 材料和方法21-40
• 讨论40-47
• 参考文献47-57
• 全文总结57-58
• 文献综述58-66
• 参考文献62-66
• 个人简历、硕士期间发表文章情况66-67
• 致谢67

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本文编号：274037