AGR2在宫颈病变中的临床意义及机制研究

发布时间：2020-07-04 04:17

【摘要】：目的:探索前梯度蛋白2(Anterior gradient 2,AGR2)在宫颈病变进展的临床意义及作用机制。方法:收集慢性宫颈炎组织(Chronic cervicitis,CC),低级别鳞状上皮内病变(Low-grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)、高级别鳞状上皮内病变(High-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)及鳞状细胞癌(Squamous cell carcinoma of cervix,SCC)的石蜡切片和临床资料分别各46、31、70、37例,通过IHC检测分析组织中AGR2及P16~(INK4)的差异表达;将宫颈病变病理诊断分别组合为三种二分类模式:慢性宫颈炎组(CC组)与宫颈病变组(LSIL组+HSIL组+SCC组,LHS组)、LSIL及以下病变组(CC组+LSIL组,CL组)与HSIL及以上病变组(HSIL组+SCC组,HS组)、非恶性宫颈病变组(CC组+LSIL组+HSIL组,CLH组)及SCC组,以P16~(INK4)作为对照,通过Logistic回归分析获取比值比(Odds ratio,OR),评估AGR2对宫颈病变的诊断价值;并通过受试者工作曲线(Receiver operator characteristic curve,ROC curve)及曲线下面积(Area under the curve,AUC),评估AGR2、P16~(INK4)及AGR2与P16~(INK4)联合检测在宫颈病变诊断的准确性。收集行子宫颈冷刀锥切(Cold Knife Conization,CKC)及宫颈环形电切手术(Loop Eelectrosurgical Excision Procedure,LEEP)经病理科医生确诊为切缘阳性、阴性的石蜡切片和完整临床资料各17例,通过IHC检测分析其中AGR2的表达差异,回顾性分析其随访资料,研究AGR2表达与宫颈锥切术后病灶残留/复发发生的相关性。培养子宫颈鳞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)细胞系Ca ski、SiHa,应用针对AGR2的siRNA(siRNA-AGR2),分别转染子宫颈鳞癌细胞,构建敲低AGR2表达水平的宫颈鳞癌细胞模型,同时设置阴性对照组siRNA-control,qRT-PCR和Western Blot技术分析各组细胞中AGR2的表达水平,验证转染效率。在构建的细胞模型基础上,分别通过CCK-8、平板克隆形成及流式细胞周期观察下调AGR2对宫颈癌细胞体外增殖能力的影响。结果:IHC结果显示,AGR2阳性表达率随宫颈病变程度加重呈递增趋势,在CC、LSIL、HSIL、SCC组中,AGR2阳性表达分别为4.3%、38.7%、65.7%、89.2%,四组比较具有统计学差异(χ2=82.760,P0.001);组内比较:宫颈炎组与LSIL组阳性率比较,差异具有统计学意义(χ2=14.195,P0.001);LSIL组与HSIL组,差异具有统计学意义(χ2=10.667,P0.001);HSIL组与SCC组,差异具有统计学意义(χ2=22.823,P0.001)。P16~(INK4)阳性表达率随宫颈病变程度加重呈递增趋势,在CC、LSIL、HSIL、SCC组中,P16~(INK4)阳性表达率分别为19.6%、51.6%、70%、91.9%,四组比较具有统计学差异(χ2=73.340,P0.001);组内比较:宫颈炎组与LSIL组阳性率比较,差异具有统计学意义(χ2=7.971,P0.001);LSIL组与HSIL组,差异无统计学意义(χ2=6.084,P=0.014,校准检验水准后无统计学意义);HSIL组与SCC组,差异具有统计学意义(χ2=28.808,P0.001)。Logistic回归分析结果显示,在CC组对比LHS组、CL组对比HS组、CLH组对比SCC组中,AGR2的OR值分别为6.440、3.022、2.204,P16~(INK4)的OR值分别为1.927、1.795、2.913,提示AGR2、P16~(INK4)与宫颈病变发生显著相关,是宫颈癌发生的危险因素。ROC曲线及AUC结果显示,在CC组对比LHS组、CL组对比HS组、CLH组对比SCC组中,AGR2的AUC分别为0.815、0.817、0.847,P16~(INK4)的AUC分别为0.786、0.788、0.860,AGR2与P16~(INK4)联合检测(新变量)AUC分别为0.858、0.851、0.902;AGR2与P16~(INK4)比较AUC,差异无统计学意义(P0.05);AGR2与P16~(INK4)联合检测的AUC均显著高于AGR2、P16~(INK4)单独检测(P0.05),提示联合检测可以提高宫颈病变诊断效能。IHC结果显示,AGR2阳性表达率在切缘阳性样本中(88.2%)显著高于切缘阴性样本(41.2%)(P0.05),随访结果显示AGR2表达率与切缘阳性患者二次手术率及宫颈病变进展相关。成功构建了敲低AGR2的宫颈癌细胞模型,在宫颈癌细胞模型的基础上证实,下调AGR2能显著抑制宫颈癌细胞的体外增殖、克隆能力,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:AGR2在子宫颈病变中有促癌作用,对不同程度宫颈病变的诊断及预测预后有一定的临床价值,可能成为宫颈癌治疗新的靶点。
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.33
【图文】：

阳性对照

46 44 1 1 0 4.3%31 19 8 3 1 38.7%70 24 10 26 10 65.7%37 4 3 5 25 89.2%46 44 1 1 0 4.3%31 19 8 3 1 38.7%46 44 1 1 0 4.3%70 24 10 26 10 65.7%46 44 1 1 0 4.3%37 4 3 5 25 89.2%31 19 8 3 1 38.7%70 24 10 26 10 65.7%31 19 8 3 1 38.7%37 4 3 5 25 89.2%70 24 10 26 10 65.7%37 4 3 5 25 89.2%

宫颈病变,统计学意义,中度

图 1-2 AGR2 在不同宫颈病变中的表达（IHC,×400）(P < 0.05)3.2 P16INK4在 CC 组、LSIL 组、HSIL 组、SCC 组中的表达通过免疫组化 EnVision 两步法分别检测 CC 组、LSIL 组、HSIL 组、SCC 组中的表达中 P16INK4的表达情况。P16INK4表达于细胞浆与细胞核，阳性表达呈浅棕、深棕色(图1-3)。CC 组组织共 46 例，阴性表达 37 例，阳性表达 9 例(弱阳性 5 例，中度阳性 2 例，强阳性 2 例)；LSIL 组组织共 31 例，阴性表达 15 例，阳性表达 16 例(弱阳性 9 例，中度阳性 5 例，强阳性 2 例)；HSIL 组组织共 70 例，阴性表达 21 例，阳性表达 49 例(弱阳性 15 例，中度阳性 18 例，强阳性 16 例)；SCC 组组织共 37 例，阴性表达 3 例，阳性表达 34 例(弱阳性 0 例，中度阳性 4 例，强阳性 30 例)。P16INK4在 CC 组、LSIL 组、HSIL 组、SCC 组中的阳性表达率呈现逐渐递增的趋势，依次为 19.6%(9/46)、51.6%(16/31)、70%(49/70)、91.9%(34/37)，四组比较具有统计学差异 (χ2=73.340，P<0.001)；将四组进行两两比较，CC 与 LSIL 组间差异具有统计学意义(χ2=7.971，P=0.005)，CC 与 HSIL 组间差异具有统计学意义(χ2=27.678，P<0.001) ，CC 与 SCC 组间差异具有统计学意义(χ2=53.356，P<0.001) ，LSIL 与 HSIL 组间差异不具有统计学意义(χ2=6.084，P=0.014) ，LSIL 与 SCC 组间差异具有统计学意义(χ2=35.965，P<0.001) ，

【参考文献】