低强度脉冲超声治疗SD大鼠卵巢早衰的实验研究

发布时间：2020-07-04 22:14

【摘要】：目的1.探讨低强度脉冲超声(Low-intensity Pulsed Ultrasound,LIPUS)对环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX)诱导卵巢损伤模型大鼠的治疗作用。2.检测与卵泡生长相关细胞因子的表达,来探讨LIPUS促进卵巢早衰(Premature ovarian failure,POF)大鼠卵巢功能恢复的分子机制。方法本研究分为两个部分:第一部分是低强度脉冲超声对SD大鼠卵巢早衰的治疗效果,第二部分是低强度脉冲超声改善SD大鼠卵巢早衰功能的机制研究。1.从100只雌性SD大鼠中按随机数字表随机选取70只建立POF动物模型。连续5天大鼠腹腔注射CTX 30mg/kg/d。最后一次注射结束后,每天早上8点对大鼠进行阴道脱落细胞涂片分析,连续14天。发情周期出现紊乱或无发情周期代表模型成功。共有62只大鼠成功建立POF动物模型。将建模成功大鼠按随机数字表随机分为超声组(n=31)和对照组(n=31)。另取30只健康雌性大鼠为空白组。超声组采用LIPUS辐照,30min/d,共10d。空白组、对照组采用与超声组相同的治疗方法,但仪器无功率输出。所有大鼠均监测发情周期和一般情况。治疗7天后,从3组中随机选取21只大鼠(按随机数字表每组7只),分别与10只健康且年龄匹配的雄性大鼠进行交配,记录怀孕鼠和新生鼠的数量和体重。然后再从3组中随机选取51只大鼠(按随机数字表每组取17只)处死,采集血液、卵巢和子宫。HE染色光镜下观察子宫、卵巢组织形态学变化及记录不同阶段卵泡的数量,ELISA法检测血清激素水平变化。2.取第一部分实验结束后剩余大鼠,共12只,剖检出右侧卵巢组织,迅速平分为两部分。一部分卵巢组织,置于4%多聚甲醛中,常温固定24h。剩余部分卵巢组织迅速置于EP管中,置于-80℃保存。最后采用免疫组织化学法和实时荧光定量PCR技术分别对生长分化因子-9(Growth differentiation factor-9,GDF-9)和骨形成态蛋白质-15(Bone morphogenetic protein-15,BMP-15)的蛋白质和信使RNA表达进行评价。结果1.与空白组相比,对照组的发情周期紊乱,闭锁卵泡和血清FSH水平均显著增加(P0.01),而其他各阶段卵泡和血清E_2、AMH水平均有所下降(P0.01)。超声辐照后,与对照组相比,超声组的发情周期恢复正常,闭锁卵泡和血清FSH水平下降(P0.01),其余各阶段卵泡显著增加(P0.01),血清E_2水平恢复正常(P0.01),AMH水平无明显变化,三组大鼠妊娠率之间、每窝新生鼠的数量和体重之间均无统计学差异(P0.05)。2.与对照组相比,超声组BMP-15蛋白质的表达,BMP-15和GDF-9信使RNA的表达均显著增加(P0.01)。结论1.LIPUS可改善POF大鼠部分卵巢功能,不能提高大鼠的卵巢储备功能,且目前本实验结果尚未发现LIPUS对POF大鼠的妊娠率和生育能力有影响。2.LIPUS可以通过促进卵巢组织中BMP-15蛋白质的表达,BMP-15和GDF-9信使RNA的表达,从而改善卵巢功能。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R711.75
【图文】：

美蓝染色,动情前期,碱性,上皮细胞

图 1.1.1 动情前期以有核上皮细胞为主(碱性美蓝染色,×100)Fig. 1.1.1 There were mainly nucleated epithelial cells atproestrus stage(Alkaline meilan staining ,×100)（Note: nuclear epithelial cells）图 1.1.2 动情期以角化上皮细胞为主(碱性美蓝染色,×100)Fig. 1.1.2 There were mainly keratinized epithelial cells atestrus stage(Alkaline meilan staining ,×100)（Note: keratinized epithelial cells）图 1.1.3 动情后期以有核上皮细胞、角化上皮细胞和白细胞为图 1.1.4 动情间期以白细胞为主(碱性美蓝染色,×100)

美蓝染色,动情期,碱性,白细胞

【参考文献】