ULBP1在子痫前期孕妇外周血外泌体中表达的分析

发布时间：2020-07-12 12:56

【摘要】：目的:子痫前期(Preeclampsia,PE)是产科严重的妊娠期并发症,目前诊断主要依靠孕晚期的临床表现及生化检查结果,而在PE发生的早期,临床表现、常规生化等变化多不典型,故发现PE可能的潜在生物学标志物具有重要的临床意义。外泌体(exosomes)是一种可由多种细胞主动分泌的大小在40-150nm的细胞外囊泡,其内含有DNA、mRNA、蛋白质等,其内容物由其分泌细胞决定,这种内容物一致性,在理论上不侵犯它们的起源组织就能表征分泌细胞或组织的正常生理或病理状态,可以作为某些疾病的指示物。胎盘在妊娠期间可以分泌特异的外泌体进入母体循环中。UL16结合蛋白1(unique long 16 binding protein 1,ULBP1)是自然杀伤(NK)细胞活化性受体凝集素样同型二聚体(Natural killer cell group 2D,NKG2D)的一个配体,目前研究提示ULBP1在PE患者的胎盘中表达上调,并参与了PE的发病,同时有研究提示可以表达在胎盘来源的外泌体膜上。目前,关于PE患者外周血外泌体中的生物活性分子的研究甚少,为此,本研究的目的在于分析正常孕妇及PE患者外周血中外泌体表达ULBP1是否具有差异性,为PE的诊治提供一定的理论依据。研究方法:选取2017年6月-2018年7月于中国医科大学附属第一医院产科收集的20例PE患者的外周血标本作为实验组(PE组),同期选取该院20例正常孕妇外周血标本作为正常对照组(NC组)。通过低速离心分离出血清,使用ExoQuick Precipitation试剂盒提取两组实验对象血清中的外泌体,采用蛋白质免疫印迹法(Western bolt,WB)检测外泌体的标志蛋白CD63,使用透射电镜鉴定外泌体的形态,使用BCA蛋白浓度测定试剂盒检测两组外泌体蛋白水平,通过酶联免疫吸附实验(EILSA)检测两组外泌体中ULBP1的水平。结果:1、WB检测外泌体的标志蛋白CD63呈阳性。2、透射电镜下可见外泌体形态呈圆形或椭圆形,典型的双层膜状结构。3、外泌体蛋白水平在PE组中高于NC组,分别是(7.5700±2.5700)mg/ml vs(6.0110±2.3070)mg/ml,P=0.0467,差异具有统计学意义(P0.05)。4、ULBP1在PE组中的水平高于NC组,分别是(1.0500±0.5937)ng/ml vs(0.4875±0.4346)ng/ml,P=0.0013,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:PE患者外周血外泌体中的ULBP1可能与PE的发生发展有关,外泌体中的ULBP1可能是PE潜在的生物学标志物。
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R714.244
【图文】：

PE 1.89 29.10.86 36.71.69 29.8±8.20/77.60±6.51 169++ 0±286.64 275的外泌体的提取、取法提取 NC 组和 PE 组用 WB 检测两组外泌电镜下可见外泌体形态

Westernblot验证两组外泌体标志蛋白分子CD63

射电镜鉴定外泌体形态,呈圆形或椭圆形及典型的双层膜囊状结构；A：PE 组（黑色箭头指示外泌体，Bar=100nm，放大倍数 67000 倍）组和PE组外泌体蛋白的水平 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定两组外泌体总蛋白含量，PE 组7.5700±2.5700）mg/ml 高于 NC 组（6.0110±2.3070）mg/ml，统计学意义（P<0.05，如图 3.4）。

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本文编号：2751991