IL-8及低剪切力诱导卵巢癌细胞上皮—间质转化的机制初探

发布时间：2020-07-14 10:40

【摘要】：目的:本研究旨在探究白细胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)及低剪切力对卵巢癌上皮-间质转化(EMT)过程的影响,并初步分析Wnt/β-catenin信号转导途径在IL-8及低剪切应力诱导卵巢癌细胞发生EMT中的作用,为IL-8及低剪切应力诱导卵巢癌细胞上皮-间质转化的分子机理的深入研究奠定基础,为卵巢癌提供更早期的诊断、预防、干预以及寻找与其相关分子靶向药物提供实验依据。方法:1.采用免疫组化检测和统计相关分析91例浆液性卵巢癌临床样本、人卵巢癌肿瘤细胞株SKOV3中IL-8及IL-8受体CXCR1、CXCR2的表达关系。2.外源性人重组IL-8(100 ng/m L)诱导处理SKOV3细胞48 h,Western blot检测Wnt/β-catenin及EMT相关蛋白的变化情况,分析IL-8对Wnt/β-catenin信号转导途径的激活以及对EMT的影响。3.采用细胞免疫荧光、Transwell、实时无标记细胞技术(RTCA)定性定量分析IL-8处理后,SKOV3细胞和人正常的卵巢上皮细胞株HOSEpiC的侵袭、迁移及细胞骨架的变化,Western blot检测纤毛驱动蛋白KIF3A的表达情况。4.利用体外流体力学加载模型(剪切应力强度:1.5 dyne/cm2,作用2 h)处理SKOV3细胞,Western blot检测Wnt/β-catenin及EMT相关蛋白的变化情况,初步分析低剪切应力对Wnt/β-catenin信号转导途径的激活以及对EMT的影响。结果:1.91例浆液性卵巢癌临床样本中,共有82例表达IL-8(90.1%),89例表达CXCR1(97.8%),88例表达CXCR2(96.7%),SKOV3中IL-8、CXCR1、CXCR2均表达阳性;卵巢癌组织中IL-8蛋白的表达与CXCR2蛋白的表达呈明显正相关关系(r=0.253,P0.05),而与CXCR1无相关关系(r=0.178,P0.05)。2.IL-8(100 ng/m L)处理卵巢癌SKOV3细胞48 h后,显著增加SKOV3细胞Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白(P-β-catenin、CD44、MET、c-Jun)表达;同时,下调上皮细胞标志物E-cadherin而上调间质细胞标志物Vimentin和snail的表达,从而促进卵巢癌细胞发生EMT。3.IL-8(100 ng/mL)诱导SKOV3细胞细胞骨架的重排,纤毛形成标志物KIF3A的表达上调,促进纤毛形成。4.Transwell和RTCA定量结果显示,IL-8(100 ng/m L)作用后,明显增强SKOV3细胞的侵袭能力(P0.05),而对HOSEpiC细胞迁移则并无影响(P0.05)。5.流体剪切应力(1.5 dyne/cm~2、2 h)处理SKOV3细胞,可显著上调P-β-catenin,激活Wnt/β-catenin信号通路,下调E-cadherin、上调Vimentin,从而促进卵巢癌细胞发生EMT。结论:以上结果显示:IL-8及低剪切应力可以通过激活Wnt/β-catenin信号途径,促使卵巢癌细胞获得EMT特性,促进细胞骨架的重排、细胞膜表面纤毛伪足的形成(KIF3A),从而增强其侵袭、迁移能力。提示:肿瘤微环境中的关键理化因素(IL-8和低剪应力)对卵巢癌细胞的作用在卵巢癌生长、局部侵袭和远处转移过程中发挥着重要的作用,与其相关的Wnt/β-catenin信号通路关键性信号分子是卵巢癌细胞早期进行恶性转化的病理性基础,为进一步深入的研究卵巢癌防治以及靶向药物的筛选提供新的治疗靶点。
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.31
【图文】：

散点图,卵巢癌组织,受体,免疫组化

IL-8 CXCR1 CXCR2图 1-1 卵巢癌组织 IL-8 及其受体 CXCR1 和 CXCR2 表达情况（免疫组化，标尺=100 μm）Fig.1-1 Ovarian tissue IL - 8 and its receptor CXCR1/CXCR2 expression(immunohistochemical, scale=100 μm)3.2 统计分析 IL-8 与 CXCR1 和 CXCR2 之间的关系用 SPSS 17.0 统计评分数据，Spearman 秩相关统计分析显示， IL-8 的表达与CXCR2 呈明显正相关关系(r=0.253，P<0.05)，而与 CXCR1 无相关关系（r=0.178，P>0.05），详见表 1-2 和图 1-2（CXCR1 与 IL-8 的散点图未显示）。提示，在卵巢癌癌组织中 IL-8 与其受体 CXCR2 结合发挥着更为重要的生物学作用。指标 IL-8相关性r 值 P 值CXCR1 0.178 0.092CXCR2 0.253 0.015

散点图,散点图,卵巢癌细胞株,均匀表

图 1-2 IL-8 与 CXCR2 评分的散点图Fig.1-2 IL-8 and CXCR2 score of scatter diagram癌细胞株 SKOV3 的免疫细胞化学结果-3 显示：标尺为 100 μm，图片中黄色区域是阳性表达区域，卵巢癌细胞株 SKOV3 中 IL-8、CXCR1、CXCR2 均匀表达，XCR1 和 CXCR2）与卵巢癌细胞株关系密切。3 细胞 IL-8 及其受体 CXCR1 和 CXCR2 的表达情况（免疫组化，标 and its receptors CXCR1/CXCR2 expression in SKOV3 cells (immunoscale=100 μm)

散点图,卵巢癌细胞株,标尺,受体

图 1-2 IL-8 与 CXCR2 评分的散点图Fig.1-2 IL-8 and CXCR2 score of scatter diagram.3 卵巢癌细胞株 SKOV3 的免疫细胞化学结果如图 1-3 显示：标尺为 100 μm，图片中黄色区域是阳性表达区域，而蓝色部细胞核。卵巢癌细胞株 SKOV3 中 IL-8、CXCR1、CXCR2 均匀表达，提示 IL-受体（CXCR1 和 CXCR2）与卵巢癌细胞株关系密切。

【参考文献】