GPR4与宫颈癌细胞增殖关系的研究

发布时间：2020-07-19 12:53

【摘要】：目的:宫颈癌是目前全球广大女性恶性肿瘤的常见疾病,亚洲发展中国家发病率尤其高,严重威胁女性健康。本研究旨在探讨GPR4与宫颈癌癌细胞增殖关系,期望为治疗宫颈癌提出新思路和作用靶。为开发与寻找新药提供实验依据。方法:构建GPR4shRNA干扰载体质粒,同原则构建pMSCV vector空载质粒。将宫颈癌hela细胞分为三组,GPR4shRNA干扰载体质粒组、pMSCV vector空载质粒组、单纯宫颈癌hela细胞组。(1)通过荧光显微镜进行观察GPR4shRNA干扰基因转染率。(2)MTT对实验分组中各组宫颈癌Hela细胞增殖能力进行分析。(3)用流式细胞仪进行检测实验分组中各组细胞的周期和细胞凋亡并进行数据分析。(4)Western blot方法检测各组GPR4蛋白及VEGF表达变化。结果:1、MTT检测结果显示:转染后GPR4shRNA干扰载体质粒实验组吸光度(OD)值均降低,宫颈癌Hela细胞增殖变缓,与其余两组对照组数据相比,差异有统计学意义(P0.05),而空白对照组和pMSCV vector空质粒组数据比较则二者差异无统计学意义(P0.05),表明GPR4基因被去除后,人宫颈癌Hela细胞株的细胞增殖减缓被抑制,且各组生长曲线对比,GPR4shRNA干扰载体质粒组生长趋势较对照组明显变慢。2、流式细胞仪测定显示:实验分组中各组宫颈癌Hela细胞各期检测结果,GPR4shRNA干扰载体转染组G1期细胞增多比较显著(P0.05),S期细胞则减少(P0.05),pMSCV vector空质粒对照组、空白对照组的宫颈癌Hela细胞二者则没有明显差异(P0.05)。3、流式细胞仪检测:实验分组中pMSCV vector空质粒对照组、空白对照组宫颈癌Hela细胞凋亡率数据分别是(3.13±0.18)%、(2.91±0.23)%,而GPR4shRNA干扰载体转染组Hela细胞凋亡率则为(10.74±0.38)%,此数据结果和实验分组中pMCVS vector空质粒对照组、空白对照组数据对比发现,差异均有显著性(P0.05)。4、Western blot方法测定:实验分组中GPR4 shRNA干扰载体转染组宫颈癌Hela细胞GPR4蛋白及VEGF表达均减少,与其余两组对比结果,GPR4蛋白及VEGF表达差异均具有显著性(P0.05)。结论:1、GPR4 shRNA干扰质粒抑制宫颈癌He La细胞生长。2、GPR4 shRNA干扰质粒可以导致宫颈癌HeLa细胞凋亡加速。3、GPR4 shRNA干扰质粒可以将宫颈癌HeLa细胞GPR4及VEGF蛋白表达明显降低,且说明GPR4表达量降低影响到VEGF蛋白表降低。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.33
【图文】：

各组细胞的生长曲线

GPR4shRNA质粒转染HeLa细胞结果

【参考文献】

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本文编号：2762447