关于褪黑素缓解环磷酰胺所诱导的卵巢纤维化作用的研究

发布时间：2020-08-02 21:27

【摘要】：目的:探讨化疗药物环磷酰胺(CTX)是否可以损伤小鼠卵巢并诱导卵巢形成纤维化,以及褪黑素是否具有保护卵巢功能并缓解环磷酰胺所诱导的小鼠卵巢纤维化的效应。方法:按照分组(Vehicle组,n=6;Melatonin组,n=6;CTX组,n=6;CTX+Melatonin组,n=6)计划性给与C57小鼠药物处理后,通过称量各组小鼠卵巢重量、处死前的小鼠阴道分泌物涂片及对HE染色的卵巢组织切片进行形态学观察和卵泡计数,同时检测小鼠血清中的抗苗勒氏管激素(AMH)浓度来评估环磷酰胺对小鼠卵巢功能的损害效应以及褪黑素是否具有保护卵巢功能的作用。另外,通过对小鼠卵巢组织切片进行天狼星红染色以及纤连蛋白(Fibronectin)免疫组织化学染色,以此来判断环磷酰胺是否诱导了小鼠卵巢形成纤维化,且褪黑素是否具有缓解由化疗药物环磷酰胺所诱导的卵巢纤维化的作用。结果:通过对小鼠的阴道涂片进行镜下观察发现,与对照Vehicle组相比,化疗药物环磷酰胺可以明显使小鼠的动情周期发生了一定比例的紊乱(67%,P=0.014)。将小鼠处死后称量各组小鼠的卵巢重量,对照Vehicle组的小鼠卵巢重量为24.66±0.39mg,而注射了环磷酰胺后的小鼠卵巢重量明显小于对照组小鼠卵巢的重量(18.15±0.49mg,P0.001)。通过观察小鼠卵巢组织切片的HE染色,环磷酰胺组小鼠的卵巢形态发生了一定程度的萎缩,且肉眼可见健康卵泡明显减少。卵泡计数发现,与对照Vehicle组相比,CTX组小鼠卵巢切片中各阶段正常卵泡(包括始基卵泡、初级卵泡、次级卵泡和窦卵泡)的数量呈现大幅度减少(P值分别为0.001、0.001、0.001及0.001),闭锁卵泡的数量则显著增加(P0.001),并且相较于对照Vehicle组小鼠血清AMH浓度(1.46±0.1 ng/ml),CTX组小鼠的血清中AMH浓度也出现了显著下降(1.00±0.12ng/ml,P=0.012)。另外通过镜下观察天狼星红染色及纤连蛋白免疫组织化学染色发现,环磷酰胺可以使小鼠卵巢产生大量的胶原纤维。与对照Vehicle组相比,除去卵泡液等正常高表达纤连蛋白的组织部分,其余卵巢组织中纤连蛋白的表达明显增加,说明环磷酰胺可以诱导小鼠卵巢形成纤维化。而在加入了褪黑素处理后则可以明显减轻这些化疗损伤,表现为:与CTX组相比,CTX+MEL组的小鼠卵巢重量出现了显著性的增加(21.88±0.75mg,P0.001),并基本恢复到对照组小鼠的卵巢重量水平;小鼠紊乱动情周期所占比例出现了一定的下降趋势(33.3%,P=0.079);小鼠卵巢形态较大程度上得到了恢复,同时各个阶段的健康卵泡的数量(包括始基卵泡、初级卵泡、次级卵泡和窦卵泡)相较于化疗药物CTX组小鼠有了明显的增加(P值分别为0.001、0.003、0.001及0.001),闭锁卵泡数量也显著减少(P=0.016)。与此同时,小鼠血清中AMH含量也出现了一定程度的升高(1.18±0.02 ng/ml,P=0.094)。另外通过对比天狼星红染色及纤连蛋白免疫组织化学染色发现,在注射了褪黑素后,小鼠卵巢总胶原纤维的含量显著减少(P0.001)并且纤连蛋白的表达也出现了下降,说明小鼠的卵巢纤维化程度得到了有效缓解。结论:环磷酰胺可以诱导C57小鼠卵巢产生纤维化,使小鼠卵巢功能受到明显损伤。而褪黑素可以有效缓解化疗药物环磷酰胺诱导的小鼠卵巢纤维化,使其较大程度上恢复卵巢功能,从而产生保护卵巢的效应。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R711.75
【图文】：

17图 1 环磷酰胺可以损伤小鼠卵巢功能。（A）为光镜下 Vehicle 组与 CTX 组的小鼠卵巢组织切片 HE 染色镜下观察情况。（B）为 Vehicle 组与 CTX 组的小鼠动情周期比较结果。（C）为 Vehicle 组与 CTX 组的小鼠卵巢卵泡计数结果。（D）为 Vehicle 组与 CTX 组的小鼠血清 AMH 浓度比较结果。*代表 P<0.05

图 2 环磷酰胺可使小鼠卵巢出现纤维化。（A）为光镜下 Vehicle 组和 CTX 组小鼠卵巢组织切片的天狼星红染色。（B）为半定量分析比较两组小鼠卵巢组织所含总胶原纤维含量的结果。（C）为光镜下 Vehicle 组及 CTX 组小鼠卵巢组织切片的纤连蛋白（Fibronectin）的免疫组织化学染色。*代表 P<0.05

19图 3 褪黑素可以有效保护由环磷酰胺诱导的小鼠卵巢功能损伤。（A）为光镜下实验各组的小鼠卵巢组织切片 HE 染色观察情况。（B）为实验各组的小鼠动情周期比较结果。（C）为实验各组的小鼠卵巢组织的卵泡计数结果。（D）为实验各组的小鼠血清 AMH 浓度比较结果。*代表 P<0.05

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