PPARs在PCOS患者外周血单个核细胞中表达的研究

发布时间：2020-08-09 00:29

【摘要】：目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferation-activated receptors,PPARs)三种不同亚型PPARα、PPARβ和PPARγ在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者外周血单个核细胞中的表达特点,分析PPARs基因与PCOS疾病发生的关系。方法:根据2011年中国多囊卵巢综合征诊断标准,收集2017年1月到2018年4月在大连大学附属中山医院妇产科门诊初诊的21例患多囊卵巢综合征的病例为PCOS组。以我院体检健康的月经周期规律、性激素水平正常、妇科彩超检查未见异常、且无患代谢性疾病的30例非PCOS女性为对照组。收集研究对象的一般资料:身高、体重、痤疮、多毛情况等。采集所有研究对象早卵泡期或闭经状态下空腹静脉血。比较研究对象的雄激素(testosterone,T)、促黄体生成素(luteinizing hormo,LH)、促卵泡刺激素(follicle stimulating hormo,FSH)、雌激素(Estradiol,E2)、空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)及空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)水平。采用梯度密度离心法提取外周血单个核细胞,利用SYBRGreen II实时荧光定量PCR检测外周血单个核细胞中PPARs基因m RNA的表达量,通过Ct值法比较两组PPARs(PPARα、PPARβ和PPARγ)基因的表达水平。分析PCOS组患者空腹血糖、空腹胰岛素、雄激素、促黄体生成素和外周血单个核细胞PPARs(PPARα、PPARβ和PPARγ)之间的相关性。结果:1.PCOS组入选年龄21~35岁,平均年龄27.47±3.62岁,月经稀少15例(71.4%),闭经2例(9.5%),不规则子宫出血4例(19%),多毛7例(33%),痤疮12例(57%),彩超提示多囊卵巢4例(19%)。对照组入选年龄23~35岁,平均年龄28.53±3.06岁,月经周期均正常。PCOS组的年龄、体重指数与对照组相比无显著性差异(P0.05)。2.PCOS组的雄激素及促黄体生成素水平均明显高于对照组(P0.05)。PCOS组的雌激素、促卵泡刺激素与对照组相比无显著性差异(P0.05)。3.PCOS组的空腹血糖、空腹胰岛素与对照组相比明显升高(P0.05)。4.PCOS组的外周血单个核细胞中PPARα、PPARβ、PPARγm RNA表达的水平均显著低于对照组(P0.05)。5.根据相关分析结果显示,PCOS组INS(r=-0.662)、T(r=-0.467)与外周血单个核细胞PPARγm RNA相对表达量均呈显著负相关(P0.05)。PCOS组FPG、INS、T、LH与PPARα、PPARβm RNA相对表达量均无显著相关性(P0.05)。结论:1.外周血单个核细胞PPARα、PPARβ和PPARγm RNA的表达异常可能与PCOS疾病的发生有关。2.PCOS患者外周血单个核细胞PPARγm RNA表达水平与雄激素、空腹胰岛素呈负相关,外周血单个核细胞PPARγ表达下调可能促进多囊卵巢综合征患者高胰岛素血症和高雄激素血症的发生。
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R711.75
【图文】：

原理图,实时荧光PCR,原理

图 1：实时荧光 PCR 原理研究资料的收集和血液检测（1）获取研究对象的一般资料：①姓名、年龄、身高、体重、血压、月经、痤疮及体毛分布情况。②了解既往有无糖尿病、高血脂、高血压、心脑血肾功能不全、炎症性疾病，有无甲状腺疾病、高泌乳素血症等其他内分泌疾科疾病病史、肿瘤病史、手术史、家族史、个人用药情况。（2）外周静脉全血的采集与处理：研究对象在月经周期第 2-5 天采血，若经患者可任意一天清晨空腹采血 3ml，在 EDTA 抗凝真空塑料管上标明研究对血标本研究编号，采血后立即轻柔颠倒,置于 4 冰箱内保存。（3）激素及生化指标的测定：采用化学发光法检验受试者空腹胰岛素、雄、促黄体生成素、促卵泡刺激素、雌激素，用全自动生化分析仪测定空腹血由大连大学附属中山医院检验科检测）。实时荧光定量 PCR 实验步骤

离心法,外周血单个核细胞,梯度,密度

大连医科大学硕士学位论文上，1800rpm 离心 30min。(4)离心后管内分为三层如（图 2 右图）所示，上稀释的血浆，下层为粒细胞和红细胞，中间絮状层即为实验所需的单个核细(5)用吸管小心吸出分离液上层（包含淋巴细胞的细胞层）0.5cm 以上的上清分弃去。(6)用吸管小心吸取分离液层及淋巴细胞层至于无菌无酶 1.5mlEP 管(7)14000rpm，离心 35min，弃去上清，获得白色固体细胞沉淀。(8)加入无菌盐水，清洗 2 遍，直至清洗液无杂质。(9)弃去上清液，加入 500ul 细胞裂解吹打混匀，直至无沉淀后静置 5min，放至-80 冰箱内保存。

基因扩增,曲线变化,对照组,曲线

求分析本实验结果可靠[25]。（图3：图A1、B1、C1、D1分别为PCOS组和对照组β -actinmRNA、 PPAR mRNA、PPARβ mRNA、PPARγ mRNA基因扩增曲线变化图）。（3）各个基因融解曲线结果分析：融解曲线呈单峰，峰的宽度较小，没有非特异性曲线，说明基因扩增产物特异性好，融解温度（Tm）的参考范围>80[25]。β -actin mRNA、PPAR mRNA、PPARβ mRNA、PPARγ mRNA的Tm值分别为：87 、85、83 、89 。（图3：图A2、B2、C2、D2分别为PCOS组和对照组β -actin mRNA、PPAR mRNA、PPARβ mRNA、PPARγ mRNA基因融解曲线变化图）。图3：图3：1-8:图A1、A2分别为PCOS组和对照组β-actin mRNA基因扩增曲线及融解曲线变化图；图B1、B2分别为PPAR mRNA基因扩增曲线及融解曲线变化图；图C1、C2分别为PPARβ mRNA基因扩增曲线及融解曲线变化图；图D1、D2分别为PPARγ mRNA基因扩增曲线及融解曲线变化图。五、统计分析实验数据使用统计学软件SPSS22．0进行分析，计量资料数据以均数±标准差（ X±S）表示，两样本间比较采用独立样本t检验，变量之间的相关性采用Pearson相关分析法，以P<0.05时视为有统计学意义。

【参考文献】