子痫前期患者血管内皮损伤的分子机制研究

发布时间：2020-08-21 10:01

【摘要】：研究目的:子痫前期(Preeclampsia,PE)是一种严重威胁孕产妇和胎儿健康的重要产科疾病,主要特征为妊娠20周出现高血压(舒张压=90 mm Hg)和蛋白尿(尿液中蛋白=300 mg/24 h);其发病率为2%-8%,是全球产妇死亡的主要原因之一。近年研究显示,子宫螺旋动脉重铸障碍,包括绒毛外滋养细胞侵袭不足、胎盘着床过浅、血管重建障碍等,可引起胎儿胎盘缺氧,母体内皮功能障碍,最终导致并促进子痫前期的发生与发展。胎盘缺氧是子痫前期的重要环节,然而目前对于胎盘因素对母体血管内皮功能的影响及具体机制尚不清楚。本研究旨通过体外、体内实验,模拟子痫前期胎盘缺氧环境,研究母体血浆s Flt-1水平提高以及内皮功能障碍发生的原因,并结合临床样本阐明子痫前期发病过程中血管内皮损伤的分子机制。研究方法:1.正常氧(20%)及低氧(1%O2)条件下培养人绒毛膜癌细胞JEG-3,收集上清,孵育人脐静脉内皮细胞(HUVEC),用流式细胞术以及酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测HUVEC细胞上清中内皮来源微粒(EMPs)以及血管内皮生长因子受体1(Fms-Like Tyrosine kinase 1,Flt-1)的含量。2.基因本体(Gene Ontology,Go)分析正常氧及缺氧JEG-3细胞上清中的差异蛋白。3.用实时定量聚合酶链式反应(Quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)、蛋白质免疫印迹法(Western blotting)的方法检测HUVEC细胞在HMGB1刺激后Flt-1、s Flt-1在m RNA以及蛋白水平的表达。4.用重组HMGB1尾静脉注射妊娠18.5天及未孕小鼠,1.5小时后取血浆,并用流式细胞仪检测血浆中微粒总数及内皮来源的微粒数。5.收集正常妊娠及子痫前期妇女血浆,用ELISA方法检测血浆中s Flt-1。6.用流式检测正常未孕、正常妊娠及子痫前期妇女血浆中的总微粒,并检测内皮来源的Flt-1+微粒的数量。研究结果:1.与正常JEG-3上清组比较,缺氧JEG-3上清显著提高HUVEC上清中的EMPs以及Flt-1含量;比较微粒去除前后的细胞上清Flt-1含量,发现上清中增加的Flt-1有部分来源于微粒。2.GO分析正常氧及缺氧JEG-3细胞上清中的差异蛋白发现,这些差异蛋白的功能主要集中在免疫反应、氨基酸代谢、囊泡运输等方面。3.HMGB1刺激HUVEC细胞能显著提高上清中的EMPs以及Flt-1;4.HMGB1能够在m RNA、蛋白水平提升HUVEC中Flt-1和s Flt-1的表达;5.静脉注射重组HMGB1升高妊娠小鼠血浆中总微粒及内皮来源微粒数;6.与正常妊娠妇女比较,子痫前期妇女血浆中Flt-1显著升高;7.与正常妊娠妇女比较,子痫前期妇女血浆中总微粒数以及内皮来源的表达FLT-1(CD31+Flt-1+)的微粒都显著升高。结论:我们发现缺氧滋养细胞释放的HMGB1能够刺激内皮细胞释放微粒,提高内皮细胞中Flt-1以及s Flt-1的表达;妊娠小鼠静脉被注射HMGB1后,其血浆中微粒总数及内皮来源的微粒数量显著提升;子痫前期患者血浆中Flt-1含量、微粒数量以及Flt-1+微粒显著高于正常妊娠女性。总之,我们的研究提示胎盘缺氧,滋养细胞会产生s Flt-1以及HMGB1等物质,损伤血管内皮细胞,参与子痫前期的发生。因此,我们提出了子痫前期患者内皮紊乱的新机制,可为子痫前期早期诊断以及治疗提供新思路。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R714.244
【图文】：

无血清,微粒,阳性对照,无血清培养基

养基 Opti 为阴性对照，TNF-a (100 ng/mL)为阳elial cell derived microparticles from HUVECs trefrom normoxic and hypoxic JEG-3 cellsOpti-MEM medium (Opti) represents the negativerepresents the positive control. n=3 per grouEG-3 上清诱导 HUVEC 细胞产生可溶性 Flt-1（分泌物对于内皮细胞的影响，我们用缺氧 JE无血清培养基 Opti 培养，24 小时后检测上清2）相较于正常培养的 HUVEC 上清，缺氧上清量明显提升（P 值<0.01）。

细胞分泌,细胞,胎盘,可溶性

2. 缺氧 JEG3 上清刺激 HUVEC 细胞分泌 soluble Flt-1 in the supernatant of HUVECs asupernatant incubated.-3 上清诱导 HUVEC 细胞产生可溶性 Flt-1 部示血浆中的 sFLT-1 有部分来自于胎盘来源后 HUVEC 细胞上清中的 sFlt-1 增加是否集缺氧 JEG3 上清孵育后的 HUVEC 细胞上UVEC 上清中的 Flt-1 含量。结果见图 3，

细胞分泌,细胞

17图 3 缺氧 JEG3 上清刺激 HUVEC 细胞分ed soluble Flt-1protein in the supernatant ofJEG-3 supernatant incubated.

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