不同处理方式对小鼠卵母细胞孤雌激活钙离子振荡的影响

发布时间：2020-09-02 08:23

　　 卵母细胞激活在受精和胚胎发育过程中起到关键作用,其中钙离子振荡在卵母细胞激活中起到重要作用。小鼠卵母细胞激活后的钙离子振荡可持续时间长达数小时。钙振荡是卵母细胞从减数分裂转化为有丝分裂过程中的重要事件,能直接影响到原核的形成、胚胎发育和胚胎植入。近年来,很多研究结果表明:钙离子振荡调控着卵母细胞激活的效率和胚胎的后续发育。但目前关于卵龄、激活液的pH值、卵母细胞的成熟方式和卵母细胞内质网应激状态对孤雌激活后钙离子振荡影响的研究还不明确。研究目的:比较不同处理方式对小鼠卵母细胞孤雌激活后钙离子振荡模式的影响。研究方法:本研究中,我们用不同的处理方法处理卵母细胞后使用氯化锶激活卵母细胞,并用活细胞工作站记录卵母细胞被激活后的瞬时钙离子浓度变化;用qRT-PCR检测了卵母细胞内质网应激标志物水平。研究内容:分别收集注射hCG(human chorionic gonadotrophin,人绒毛膜促性腺激素)13h、15h、17h、19h和21h后的卵母细胞,研究不同卵龄对孤雌激活后钙离子振荡的影响;研究激活液不同pH值(pH6.4,pH6.6,pH6.8,pH7.0,pH7.2,pH7.4和pH7.6)对卵母细胞孤雌激活钙离子振荡的影响;另外,比较体外培养17h的裸卵和卵丘-卵母细胞复合物与体内成熟卵母细胞(注射hCG 17h后收集卵母细胞)孤雌激活后钙离子振荡方式;最后,我们分别用2.5-50 μ/ml的衣霉素诱导卵母细胞发生内质网应激,研究内质网应激对卵母细胞孤雌激活钙离子振荡的影响。研究结果:实验结果提示注射hCG 17h后收集的卵母细胞孤雌激活后钙离子振荡频率最快,钙离子振荡周期最短。激活液的pH值为6.8至7.6时不影响钙离子振荡模式,但pH6.6组和pH6.4组钙离子振荡的频率显著低于pH 7.2组,而振荡周期显著高于pH7.2组。此外,体外成熟的卵母细胞与体内成熟卵母细胞相比,其孤雌激活钙离子振荡的频率和峰值显著降低。体外成熟卵丘-卵母细胞复合物组孤雌激活后钙离子振荡的频率和峰值显著高于裸卵组,钙离子振荡的周期显著低于体外成熟裸卵组。然而,在体外成熟的卵丘-卵母细胞复合物卵母细胞孤雌激活后钙离子振荡的频率和峰值水平均低于体内成熟的卵母细胞。最后,我们用2.5-50 μg/ml衣霉素诱导卵母细胞的内质网应激,结果发现衣霉素诱导的内质网应激影响钙离子振荡模式,表现为钙离子振荡周期显著延长和频率显著降低。结论:实验结果提示不同卵龄,激活液的pH值和卵母细胞成熟方式是影响孤雌激活钙离子振荡的关键因素。同时内质网应激损害了小鼠卵母细胞孤雌激活后的钙振荡模式。
【学位单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R714

【参考文献】

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本文编号：2810364