TASK-3通道涉及麻醉药对卵巢癌生长和转移不同影响及机制

发布时间：2020-09-09 08:38

　　 第一部分麻醉药对卵巢癌生长和转移的不同影响目的:体外检测麻醉药物对卵巢癌细胞增殖、细胞周期、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。且检测麻醉药对在体卵巢癌生长和肺转移的影响。方法:CCK-8和流式细胞仪检测给予不同麻醉药(利多卡因、七氟烷、丙泊酚)处理培养24h后对细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。Transwell检测利多卡因和七氟烷对SKOV-3细胞迁移、侵袭能力的影响。构建卵巢癌异种皮下移植模型和尾静脉注射卵巢癌细胞构建卵巢癌肺转移模型,腹腔注射利多卡因和吸入七氟烷处理27天后,测量瘤体体积和重量评估对肿瘤生长的影响,及取肺做HE染色评估对肺转移的影响。结果:相比Control组,利多卡因可浓度依赖性抑制SKOV-3细胞的增殖能力,细胞周期出现G2期阻滞,细胞凋亡率增加。而七氟烷使SKOV-3细胞增殖能力增强,G2期细胞增多,细胞凋亡率减少,而丙泊酚在临床有效浓度内只有在大于100μM时细胞增殖能力降低。利多卡因可使SKOV-3细胞迁移和侵袭能力显著减弱,七氟烷使细胞迁移和侵袭能力增强。在体腹腔注射利多卡因可显著抑制肿瘤的生长及肺转移,七氟烷可促进肿瘤的生长和肺转移。结论:利多卡因可浓度依赖性抑制细胞增殖,细胞周期阻滞,促进凋亡。七氟烷可促细胞增殖,G2期细胞增加,细胞凋亡减少。利多卡因减弱细胞迁移和侵袭能力,七氟烷可增强细胞迁移和侵袭能力。在体肿瘤模型中,利多卡因可显著抑制卵巢癌的生长和肺转移,而七氟烷可促进卵巢癌的生长和肺转移。第二部分TASK-3通道涉及局麻药和吸入麻醉药对卵巢癌生长和转移的影响目的:检测TASK-3通道在人正常卵巢组织和卵巢癌组织标本及人卵巢癌细胞系SKOV-3中的表达,并探究TASK-3通道在利多卡因和七氟烷对卵巢癌细胞凋亡、迁移和侵袭的影响及对在体卵巢癌生长和肺转移的影响中的作用。方法:从协和医院妇产科收集人正常卵巢组织和人卵巢癌组织标本,及培养人正常卵巢上皮细胞系IOSE-80和人卵巢癌细胞系SKOV-3。用RT-PCR和Western blot检测TASK-3通道mRNA和蛋白表达水平。构建TASK-3 shRNA慢病毒后转染细胞,并筛选病毒稳转的细胞,确定shRNA序列。分别用利多卡因和七氟烷处理SKOV-3和TASK-3 shRNA稳转的细胞,流式细胞仪检测利多卡因和七氟烷处理对SKOV-3凋亡的影响,Transwell检测上述处理对SKOV-3迁移、侵袭能力的影响。筛选TASK-3shRNA慢病毒稳转的细胞,并构建卵巢癌异种皮下移植模型和尾静脉注射卵巢癌细胞构建卵巢癌肺转移模型,观察腹腔注射利多卡因和吸入七氟烷处理27天后,对卵巢癌生长和肺转移的影响。结果:相比于人正常卵巢组织,在mRNA和蛋白水平,TASK-3通道在人卵巢癌组织中均出现显著上调。同样,相比IOSE-80,TASK-3通道在SKOV-3中也出现表达上调。成功构建和筛选TASK-3 shRNA慢病毒稳转的SKOV-3细胞,TASK-3通道表达量显著下降。给予利多卡因或TASK-3 shRNA后均可使细胞凋亡率增加,迁移和侵袭能力减弱。而TASK-3 shRNA预处理可减轻上述利多卡因的效应。给予七氟烷后,SKOV-3细胞凋亡率降低,迁移和侵袭能力增强。TASK-3 shRNA预处理可减轻七氟烷的效应。TASK-3 shRNA组,相比未做处理的对照组,小鼠肿瘤生长减缓,肺转移减弱。利多卡因可显著抑制卵巢癌的生长及肺转移,TASK-3 shRNA预处理可减轻利多卡因的抗肿瘤效应。七氟烷可促进肿瘤的生长和肺转移,TASK-3 shRNA预处理可减轻七氟烷的促肿瘤效应。结论:TASK-3 shRNA和利多卡因可引起卵巢癌细胞凋亡增加,细胞迁移和侵袭减弱,TASK-3 shRNA可减轻利多卡因引起的上述效应。而七氟烷可引起肿瘤细胞凋亡减少,细胞迁移和侵袭能力增强,TASK-3 shRNA预处理可减轻七氟烷的效应。在体肿瘤模型中,利多卡因可显著抑制卵巢癌的生长和肺转移,而七氟烷可促进卵巢癌的生长和肺转移,TASK-3 shRNA预处理可减轻上述药物效应。第三部分线粒体TASK-3通道参与局部和吸入麻醉药对卵巢癌细胞凋亡的影响目的:检测TASK-3通道在人卵巢癌细胞系SKOV-3中的亚细胞定位,并探究TASK-3通道在利多卡因和七氟烷对卵巢癌细胞凋亡、线粒体膜电位、细胞色素C的影响中作用。方法:细胞免疫荧光检测TASK-3通道细胞内分布情况。筛选TASK-3 shRNA慢病毒稳转的细胞,分别用利多卡因和七氟烷处理SKOV-3和TASK-3 shRNA稳转的细胞,流式细胞仪检测线粒体膜电位,Western blot检测细胞色素C(Cytochrome C)的变化。结果:线粒体主要集中在细胞核周围,TASK-3通道除了分布在胞膜上,线粒体有大量分布,细胞核内也有分布。给予利多卡因或TASK-3 shRNA后均可使细胞线粒体膜电位下降,Cytochrome C从线粒体漏入胞质,线粒体中Cytochrome C下降,胞质中Cytochrome C增加。而给予七氟烷后细胞线粒体膜电位增加。结论:TASK-3通道在人卵巢癌细胞SKOV-3线粒体中高表达。利多卡因可引起卵巢癌细胞线粒体膜电位下降,Cytochrome C从线粒体漏入胞质,启动细胞凋亡,TASK-3shRNA可减轻利多卡因的效应。七氟烷可引起肿瘤细胞线粒体膜电位增加,TASK-3shRNA可减轻七氟烷对线粒体膜电位的效应
【学位单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R737.31;R614
【部分图文】：

0.1,1,2,5 mM。动物实验用的是 3泊酚购置于阿斯利康公司，用乙醇配成 100养，配成 5,10,100μM。药r: 制作 2 个 1.5L 的塑料容器（1 个实验动物（inlet）和出口（outlet）,底部设一个小电风好。分为 5% 二氧化碳， 21% 氧气和其余为氮种气体有限公司。入，体外细胞实验将细胞培养板放入 Cham流量 5L/min，通气 5min, 后打开七氟烷挥仪检测七氟烷的浓度。

分为 5% 二氧化碳， 21% 氧气和其余为氮种气体有限公司。入，体外细胞实验将细胞培养板放入 Cham流量 5L/min，通气 5min, 后打开七氟烷挥仪检测七氟烷的浓度。图 1. 吸入七氟烷挥发罐

别加入 10μl PI 和 5μl Annexin-Ⅴ-FITC。吹打混匀后放入 4℃避光。上机检测，选择 BD 流式细胞仪的第 1，3 通道，检测细胞-Ⅴ-FITC 和 PI 单染的未处理的细胞作为实验的空白对照，每个每个实验需三次重复。仪圈门，结果统计分析。well 实验ell 实验原理图如图 3，将细胞种于 Transwell 上室，上室给予予含血清培养基，细胞可趋化穿过聚碳酸酯膜向下室移动。当atrigel，类似于细胞外基质组分）时，细胞移动到下室，模拟估肿瘤细胞的迁移能力。当膜上未铺设基质胶（Matrigel）时属蛋白酶等物质消化细胞外基质，模拟细胞侵袭过程，用于评

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本文编号：2814753