基于CAM模型联合3D培养检测苯并噻唑类衍生物a10抗卵巢癌作用的研究

发布时间：2020-09-18 21:33

　　 目的:初步探索化合物苯并噻唑类衍生物a10抗人卵巢癌SKOV3细胞株的活性,为治疗卵巢癌新药的研发提供实验基础。方法:①将14种合成的苯并噻唑衍生物对人卵巢癌SKOV3细胞株进行24小时的MTT细胞活性影响实验(顺铂作为阳性对照),计算14种苯并噻唑类衍生物作用于SKVO3细胞24小时后的IC50,将IC50值最低的化合物a10用于后续实验。②通过流式细胞凋亡实验检测a10对人卵巢癌SKOV3肿瘤细胞株凋亡率的影响。实验组(化合物a10浓度分别25/50/75μmol/L)、阳性对照组(顺铂0.66μmol/L),阴性对照组(等量高糖培养基/0.9%生理盐水)。③通过细胞划痕实验、transwell实验检测化合物a10对人卵巢癌SKOV3肿瘤细胞株的迁移能力的影响。④利用荧光定量PCR(Real-Time qPCR)检测化合物a10抗人卵巢癌SKOV3肿瘤细胞株8小时及12小时后BCL-2和Bax的mRNA表达量。⑤制作鸡胚尿囊膜(CAM)肿瘤模型,以此模型检测化合物a10对人卵巢癌SKOV3肿瘤细胞株生长的抑制作用。⑥利用3D细胞培养技术检测a10抗人卵巢癌SKOV3肿瘤细胞株生长的远期毒性。结果:在14种苯并噻唑衍生物中,化合物a10抗人卵巢癌SKOV3肿瘤细胞株效果突出,其72h IC50值为57.38μmol/L;流式细胞凋亡实验结果显示高浓度的化合物a10(实验组)促进肿瘤细胞凋亡明显;化合物a10抑制人卵巢癌SKOV3肿瘤细胞株迁移力的作用具有时间依赖性和浓度依赖性;通过q-PCR实验检测出化合物a10同时促进Bcl-2和Bax的mRNA表达量增高;人卵巢癌SKOV3肿瘤细胞株浓缩液种植在孵育8天的鸡胚尿囊膜上3-5天就能够顺利的长出肿瘤,建模成瘤率最佳的SKOV3细胞量为4*10~6个,肿瘤组织切片HE染色后镜下观具有和卵巢癌肿瘤组织相同的生理特性,通过鸡胚尿囊膜肿瘤模型观察a10具有抗人卵巢癌SKOV3细胞肿瘤生长的作用;3D细胞培养技术观察化合物a10对肿瘤细胞的远期毒性随浓度增加和作用时间的延长而增强。结论:苯并噻唑衍生物a10有较好的抗人卵巢癌SKOV3细胞株活性可能成为一种新型的抗卵巢癌的化合物,为解决复发和耐药卵巢癌患者化疗提供一个新的研究方向。
【学位单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R737.31
【部分图文】：

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鸡胚尿囊膜制作过程图

鸡胚发育过程

【参考文献】

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本文编号：2822206