MCM4及相关因素对IVF-ET妊娠结局影响的研究

发布时间：2020-09-19 15:16

　　【目的】为进一步提高体外受精-胚胎移植的临床妊娠率,从分子生物学角度探索不孕症的发病机制,通过筛选微小染色体维持蛋白4(minichromosome maintenance protein 4,MCM4)所对应的基因为研究对象,明确其在体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)周期中的动态变化,分析MCM4及相关因素对IVF-ET妊娠结局的影响及在IVF-ET周期中的变化原因,为临床的诊断和治疗提供思路和依据。【方法】以2017年6月-2017年12月于大理大学第一附属医院生殖医学科行体外受精-胚胎移植的不孕症患者为研究对象,根据IVF-ET的妊娠结局分为妊娠成功组和妊娠失败组,每组各20例患者。所有患者均采用标准长方案进行控制性超促排卵,经阴道超声监测卵泡发育,卵泡成熟后在超声引导下行穿刺取卵,常规体外受精18小时后,观察受精结果,66-68小时后进行碎片评估和胚胎分级,并选择优质胚胎进行移植,于移植15天后,通过血清β-hCG检测结果判断是否妊娠成功。收集所有研究对象的相关临床资料(年龄、不孕年限、体重指数、抗苗勒管激素、卵泡刺激素、黄体生成素、雌二醇、孕酮、人绒毛膜促性腺激素、促性腺激素总用量(Gn总用量)、控制性超促排卵天数(COH天数)、窦卵泡计数、获卵数、受精率、获胚数、优质胚胎数、优质胚胎形成率、移植胚胎数、移植胚胎中优质胚胎占比妊娠结局等)。同时收集两组患者治疗过程中不同时期(行IVF-ET治疗前阶段,Stage I;卵巢刺激开始阶段,Stage II;胚胎移植后15天确认生化妊娠阶段,Stage III)的外周血样本分离淋巴细胞,提取细胞中RNA,然后进行荧光定量PCR检测其MCM4 mRNA表达情况。对相关临床资料及MCM4结果进行分析。【结果】1、两组患者一般资料的比较:两组患者一般资料,年龄、体重指数(BMI)、不孕年限和抗苗勒管激素水平的比较差异无统计学意义(P0.05)。2、各实验阶段患者激素水平对比:两组患者Stage I和Stage II的卵泡刺激素、黄体生成素、孕酮、雌二醇水平对比,差异无统计学意义(P0.05),Stage III的孕酮和人绒毛膜促性腺激素水平对比,差异有统计学意义(P0.05)。3、促排卵情况对比:两组患者促排卵过程中Gn总用量和COH天数对比,妊娠失败组的Gn总用量和COH天数均多于妊娠成功组,差异有统计学意义(P0.05);两组患者窦卵泡计数的差异无统计学意义(P0.05)。4、获卵及胚胎情况对比:两组患者获卵总数及获胚数对比,妊娠成功组获得MII卵子数、获得胚胎数及优质胚胎数多于妊娠失败组,差异有统计学意义(P0.05);但两组患者的获卵总数、受精率和优质胚胎形成率差异无统计学意义(P0.05)。5、移植情况对比:两组患者的移植胚胎数和移植时子宫内膜厚度对比,差异无统计学意义(P0.05)。两组移植时的优胚占比、子宫内膜分型和移植中粘液出血情况,差异无统计学意义(P0.05)。6、各实验阶段患者MCM4表达情况对比:经过比较Ct法换算后,Stage I和Stage III时妊娠成功组患者MCM4 mRNA的表达量显著高于妊娠失败组,差异有统计学意义(P0.05);妊娠成功组在Stage III时期MCM4 mRNA的表达量显著低于该组Stage I时,差异有统计学意义(P0.05)。【结论】1、本次研究中不孕症患者基础激素水平无法预测IVF-ET妊娠结局。2、较高的Gn用量和较长的COH时长会影响不孕症患者的卵子成熟度和卵子质量。3、在移植的胚胎数目和质量大致相当且子宫内膜厚度≥8mm的情况下,移植时子宫内膜厚度无法预测IVF-ET妊娠结局。应考虑应用全程动态的子宫内膜检测,并在需要时给予人工干预。4、较高的HCG、孕酮水平,较多的MII卵子数、获得胚胎数、优质胚胎数,以及Stage I期和Stage II期MCM4的高表达是妊娠的保护因素;较高的Gn用量和较长的COH时长是妊娠的危险因素。
【学位单位】：大理大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R714.8
【部分图文】：

卵泡,用量,卵巢过度刺激综合征,卵泡刺激素

RH-a 后第 10-14 日检查血清卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LE2）及人绒毛膜促性腺激素（HCG），并进行经阴道超声监测(Tranund,TVS)。当结果符合垂体降调节标准（子宫内膜≤5 mm，卵泡直血清 FSH＜5 IU/ml，LH＜5 IU/ml，E2＜50 pg/ml）时可以开始 G起始剂量常为 150-225 U/d，我科的常用药有丽申宝、果纳芬和尿an menopausal gonadotropin，HMG），一般根据患者情况给予个体，启动后第 5 天行 TVS 监测卵泡发育情况，并检测血清 FSH、平，根据卵泡发育情况及时调整 Gn 用量，此后隔日复查血 FSH、日或每日行 TVS 监测卵泡发育（如图 2.1），并酌情调整 Gn 用量G 当天。HCG 注射时机：TVS 显示有 1 个直径≥19 mm 的优势卵）或 2-3 个直径≥17 mm的优势卵泡或直径≥16 mm 的期望卵泡比例0%-70%，血 E2水平达到平均每个优势卵泡 200 pg/ml 时，停止注G，当晚注射 HCG 250 μg，注射 32-36 h后行经阴道超声引导下穿刺卵巢过度刺激综合征（ovarian hyper stimulationsyndrome，OHSS）风 HCG 用量。

优势卵泡,卵子

图 2.2 优势卵泡图2.3.2 卵子和精液的处理一、卵子处理（1）培养皿的配置：用预先配制好并于6%浓度的CO2培养箱（Thermo Forma3111，美国）中过夜平衡至 37 ℃的 M-HTF+10%SSS 培养液、HTF+10%SSS 培养液和 Oil（Irvine Scientific，美国）加入 Falcon3037 培养皿（Falcon，美国）中制成不同的培养皿。每位取卵者准备漂洗皿 1 个：中央圈加入1mlM-HTF+10%SSS，外圈加入 1-3mlM-HTF+10%SSS；授精皿 1 个：中央圈加入 1mlHTF+10%SSS，外圈加入 1mlHTF+10%SSS；培养皿 1 个：中央圈加入0.7mlHTF+10%SSS，再在其上覆盖 0.3ml Oil。（2）卵子漂洗：将卵泡液中找到的卵子收集到漂洗皿的外圈，用巴氏管反复抽吸清除血细胞和污渍，再转移至漂洗皿中央圈，直到取卵结束将中央圈中收集到的全部卵子再次进行抽吸清洗，并转移至授精皿外圈进行第三次清洗后再转

受精卵,胚胎

图 2.3 2PN 受精卵优选胎评级和选择用Peter卵裂期胚胎评分系统对胚胎进行分级[23]：I级胚胎个细胞，且细胞大小均匀，形态规则，透明带完整，胞空泡现象，碎片量在 0-10%之间。II 级胚胎（如图 2.5）：细胞大小略不均匀，形态略不规则，胞质可有少量颗粒之间。III 级胚胎（如图 2.6）：第 3 日有 5-6 个细胞，但可有明显的形状不规则，胞质可有颗粒或空泡，碎片量胎（如图 2.7）：第 3 日细胞数≤4 个或细胞大小严重不均现象，碎片量在 50%以上。其中 I、II 级胚胎为优质胚胎选取两枚评级最好的胚胎进行移植，年龄大于 35 岁的高的患者可一次移植三枚胚胎，子宫内膜或身体条件不适的

【参考文献】