自噬对TRAIL诱导Hela细胞凋亡的影响

发布时间：2020-09-30 16:56

　　 目的:本实验初步探讨自噬对肿瘤坏死因子凋亡相关诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的影响,为将TRAIL应用于宫颈癌治疗提供新的策略。方法:⑴体外培养人宫颈癌Hela细胞株。⑵用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度TRAIL作用及TRAIL与3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)或氯喹(chloroquine,CQ)联合作用的Hela细胞增殖活性,倒置显微镜下观察Hela细胞的形态变化。⑶免疫荧光法(immunofluorescence,IF)对微管相关蛋白1轻链3B(microtubule associated protein 1 light chain3B,LC3B)、p62进行荧光染色,并在荧光显微镜下观察;用DAPI染色观察Hela细胞凋亡。⑷用蛋白质印迹法检测LC3B、p62及聚ADP核糖聚合酶(poly-ADP-ribose polymerse,PARP)蛋白的表达水平。⑸数据分析用SPSS17.0软件,计量资料以均数±标准差表达,组间均数比较用方差分析,以P0.05为差异有统计学意义。结果:⑴TRAIL可抑制Hela细胞的增殖活性:不同浓度TRAIL处理Hela细胞48 h,Hela细胞的增殖活性随浓度增大而下降,半数抑制率浓度为6.54 ng/m L,选择TRAIL药物浓度在IC50值以下,2.0 ng/m L作为后续实验浓度。⑵3-MA或CQ增强TRAIL对Hela细胞的增殖抑制作用:TRAIL与3-MA或CQ联合作用于Hela细胞其增殖活性与单独使用TRAIL或3-MA或CQ组相比明显降低,P0.05,差异有显著意义。⑶TRAIL可诱导Hela细胞发生自噬:TRAIL作用于Hela细胞,Hela细胞内LC3聚集体增多,LC3荧光点及LC3Ⅱ蛋白水平升高,说明TRAIL可诱导Hela细胞内自噬体的形成;TRAIL与CQ联合作用于Hela细胞较单独TRAIL或CQ作用,LC3聚集体显著增加,LC3荧光点及LC3Ⅱ蛋白水平显著升高,证实LC3聚集是由自噬活性增强引起的;3-MA、TRAIL与3-MA联合作用于Hela细胞,LC3荧光点及LC3Ⅱ蛋白水平降低,提示3-MA可抑制自噬。TRAIL组与control组相比,p62荧光点及蛋白水平明显降低;加入自噬抑制剂组(CQ、TRAIL+CQ、3-MA、TRAIL+3-MA组)p62荧光点及蛋白水平较TRAIL组升高。总之,TRAIL可诱导Hela细胞发生自噬;3-MA、CQ可抑制细胞自噬。⑷3-MA或CQ明显增强TRAIL诱导的Hela细胞凋亡:DAPI染色发现,TRAIL与3-MA或CQ联合作用Hela细胞的凋亡率与单独使用TRAIL或3-MA或CQ比较明显增高,P0.05,差异有统计学意义。⑸3-MA或CQ增强TRAIL诱导的凋亡相关蛋白的表达:TRAIL与3-MA或CQ联合作用于Hela细胞,cleavage-PARP的表达较TRAIL组显著增加,P0.05差异有意义。结论:1.TRAIL可抑制Hela细胞的增殖活性,并且呈剂量依赖性。2.TRAIL在诱导Hela细胞凋亡的同时也可诱导自噬的发生,且自噬对Hela细胞的存活起保护作用。3.抑制自噬可增强TRAIL诱导的Hela细胞凋亡。
【学位单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2016
【中图分类】：R737.33
【文章目录】：
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英文摘要
常用缩写词中英文对照表
前言
1 材料与方法
    1.1 细胞株
    1.2 主要试剂和仪器
    1.3 主要试剂的配制
    1.4 实验方法
    1.5 统计学分析
2 结果
    2.1 TRAIL抑制Hela细胞的增殖活性
    2.2 3-MA或CQ明显增强TRAIL对Hela细胞的增殖抑制作用
    2.3 TRAIL诱导Hela细胞发生自噬
    2.4 3-MA或CQ明显增强TRAIL诱导的Hela细胞凋亡
    2.5 3-MA或CQ增强TRAIL诱导的凋亡蛋白的表达
3 讨论
4 结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
在学期间参与或承担的科研课题与研究成果
个人简历

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本文编号：2831105