维生素D水平与其代谢通路相关基因表达及胚胎质量关系的研究

发布时间：2020-11-02 10:47

　　 研究背景维生素D(Vitamine D,VD)是皮肤经紫外线照射后产生的一种类固醇激素。它除了在维持骨骼健康、调节钙磷平衡方面发挥重要作用外,研究表明:维生素D受体还存在于子宫、卵巢、睾丸等生殖器官,在子宫内膜及卵泡的生长发育、精子质量优劣方面发挥重要的生物学效应。维生素D代谢通路基因CYP2R1、CYP27B1、CYP24A1、GC和维生素D受体(Vitamine D Receptor,VDR)的异常表达可能影响维生素D水平,从而影响生殖功能的发挥。1978世界首例试管婴儿在英国诞生,此后辅助生殖技术(Assisted Reproduction Technique,ART)发展迅猛。随着不孕症发病率的逐年增加,辅助生殖技术越来越被大众熟知和接受,但其临床妊娠率遭遇瓶颈,徘徊在50%。在许多研究中已经报道了维生素D对临床妊娠率和活产率的影响,但是研究结果并不一致,存在很大争议。维生素D在不孕人群的分布及影响因素缺乏大数据研究,同时维生素D在ART过程中是否有明确作用仍然难以捉摸。胚胎质量作为影响临床妊娠率的关键环节之一,通过研究维生素D水平与ART技术中获卵率、正常受精率(2PN率)、优质胚胎率(简称优胚率)的关系,以期为预测胚胎质量,改善胚胎质量提供依据。CYP2R1、CYP27B1、CYP24A1、GC和VDR作为关键调控基因,在维生素D合成、代谢、转运等方面发挥重要作用,与卵泡生成、胎盘性激素分泌及子宫内膜炎因子的生成等机体许多重要生理学功能密切相关,其异常表达将影响体内维生素D水平及其生物学功能的发挥。本研究将采用逐层递进,层层深入的方式,从血清维生素D在不孕症人群中的分布水平及相关因素的研究,到卵泡液维生素D水平与辅助生殖技术中受精、胚胎质量的关系探讨,最后进一步研究维生素D代谢通路相关基因的表达,以期为不孕症处理及更好的提高临床妊娠率提供线索。第一部分维生素D水平与不孕症人群相关因素分析目的研究血清中维生素D在不孕症人群中的分布水平,分析维生素D水平与不孕症患者基本情况及实验室相关指标的关系。材料与方法1.研究对象(1)回顾性分析2016年6月～2018年12月郑州大学第三附属医院生殖医学中心第一次接受辅助生殖技术助孕治疗的不孕症患者,共计12261例。(2)病例纳入标准:因输卵管因素、排卵障碍、子宫内膜异位症、卵巢早衰、复发性流产、男方因素(重度少弱畸精症、无精症)、不明原因而行夫精人工授精(Artificial Insemination by Husband,AIH)和供精人工授精(Artificial Insemination by Donor,AID)、体外受精(In Vitro Fertilization,IVF)、卵胞浆内单精子显微注射(Intracytoplasmic Sperm Injection,ICSI)、胚胎植入前遗传学诊断(Preimplantation Genetic Diagnosis,PGD)、胚胎植入前遗传学筛查(Preimplantation Genetic Screening,PGS)的患者。(2)排除标准:有辅助生殖助孕技术禁忌症者;近半年内补充维生素D药物史者;严重的内科疾病如高血压、糖尿病者。(3)分组情况:根据血清25(OH)D水平分成两组:VD缺乏组(25(OH)D≤50 nmol/L),VD非缺乏组(25(OH)D50 nmol/L)。其中缺乏组10077例,非缺乏组2184例。2.研究方法(1)记录患者的基本情况,包括:年龄、不孕年限、体重指数(Body Mass Index,BMI)、血压、家族史;测定实验室指标包括:血型、肝肾功能、空腹胰岛素水平、血清25(OH)D水平及测定时间、基础内分泌、临床诊断包括是否有PCOS、子宫内膜异位症等。(2)统计方法:所有的数据均采用SPSS21.0统计软件进行整理并作出分析,基础信息资料采用均数±标准差((?)±s)来表示。对于分类变量使用卡方检验组间进行比较,如果超过20%的期望值小于5,则采用Fisher精确检验。对于连续变量,根据是否服从正态性和方差齐性采用Student's t检验或Mann-Whitney检验,多因素分析均采用logistic回归。以α=0.05为检验水准。结果1.患者一般临床资料的比较VD缺乏组与非缺乏组两组间比较,女方BMI、血型、家族史和是否有子宫内膜异位症均无显著性差异(P0.05)。2.不同维生素D水平组间占比情况VD缺乏组10077例,占82.19%,非缺乏组2184例,占17.81%。3.VD缺乏组与非缺乏组在年龄、VD测定季节、胰岛素抵抗、PCOS方面差异有统计学意义(P0.05)。4.回归分析,调整混淆因素后的结果(1)BMI、PCOS、血型、家族史、子宫内膜异位症不影响维生素D水平(P0.05)。(2)高龄(35岁)是维生素D的保护性因素:≤35岁女性较35岁更易维生素D缺乏(P0.05)。(3)维生素D测定季节影响其水平:夏秋季维生素D水平明显高于冬春季(P0.05),春季明显高于冬季(P0.05)。(4)胰岛素抵抗影响维生素D水平:胰岛素抵抗较非胰岛素抵抗组更易维生素D缺乏(P0.05)。小结不孕症患者多存在维生素D缺乏;维生素D水平受女方年龄、测定季节、胰岛素抵抗的影响;BMI、PCOS、血型、家族史、子宫内膜异位症不影响维生素D水平。第二部分维生素D水平与ART助孕获卵及胚胎质量关系的探讨目的探讨血清和卵泡液中维生素D水平的相关性;评估卵泡液中维生素D水平与获卵率、正常受精率(2PN率)、优质胚胎率(简称优胚率)的关系。材料与方法1.研究对象(1)选取2018年12月～2019年1月于郑州大学第三附属医院生殖医学中心接受IVF助孕的196例患者为研究对象。(2)病例纳入标准:女方年龄≤35岁,男方年龄:40岁,抗苗勒管激素(AMH)1.1 ng/ml或者基础窦卵泡数7个,均采用长方案(包括黄体中期长方案和长长方案)。病例排除标准(1)严重的内科疾病;(2)合并其他影响代谢的内分泌疾病(如甲状腺疾病、高催乳素血症等);(3)子宫内膜异位症;(4)近半年内补充维生素D药物史者。(3)分组情况:根据卵泡液中维生素D水平划分为三组:VD充足组(34例):25(OH)D≥75 nmol/L,VD不足组(64例):50 nmol/L25(OH)D75 nmol/L,VD缺乏组(98例):25(OH)D≤50 nmol/L。2.研究方法(1)记录患者一般情况、测定空腹胰岛素、血清和卵泡液中25(OH)D水平及性激素包括LH、FSH、E2、P等水平,记录获卵数、正常受精数、胚胎质量等。(2)统计方法:定量资料采用Shapiro-Wilk法进行正态性检验,符合正态分布的定量资料以均数±标准差((?)±s)来表示,组间比较采用两独立样本均数的t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间多重比较采用LSD法;不符合正态分布的定量资料以中位数和四分位数[M(P25,P75)]表示,组间比较采用Mann-Whitney U检验,多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验。定性资料以率表示,组间比较采用卡方检验。以α=0.05为检验水准。结果1.患者一般临床资料的比较VD缺乏组、不足组与充足组相比较,除血型(P0.05)外,其余均无显著性差异(P0.05)。2.血清与卵泡液中维生素D水平的比较血清和卵泡液中维生素D水平呈正相关,相关系数为r=0.832(P0.01)。3.VD缺乏组、不足组与充足组获卵率的比较VD缺乏组、不足组与充足组,三组间及两组间比较差异均无统计学意义(P0.05)。4.VD缺乏组、不足组与充足组2PN率及优胚率的比较(1)VD缺乏组与充足组比较,两者2PN率无显著性差异(P0.05),但对于优胚率,VD缺乏组明显低于充足组(P0.05)。(2)VD缺乏组2PN率及优胚率均显著性低于VD不足组(P0.05)。(3)VD不足组2PN率和优胚率与充足组相比无统计学意义(P0.05)。小结血清25(OH)D水平可反映卵泡液中25(OH)D水平。维生素D水平不影响获卵率,但会对2PN率、优胚率产生影响。第三部分维生素D水平与其代谢通路相关基因表达关系的研究目的测定卵泡颗粒细胞内维生素D代谢通路相关基因CYP2R1、CYP27B1、CYP24A1、GC和VDR m RNA表达水平,探讨血清维生素D水平、PCOS、胰岛素抵抗与维生素D代谢通路相关基因表达的关系。材料与方法1.研究对象(1)收集2018年12月至2019年1月在郑州大学第三附属医院生殖医学中心接受IVF助孕治疗的196例患者资料,从中按照血清中维生素D水平高低选取69名患者,测定卵泡颗粒细胞中维生素D代谢通路相关基因m RNA表达。(2)分组情况:(1)根据血清25(OH)D水平,分成VD充足组(14例):25(OH)D≥75 nmol/L、VD不足组(23例):50 nmol/L25(OH)D75 nmol/L、VD缺乏组(32例):25(OH)D≤50 nmol/L。(2)根据多囊卵巢综合征(Polycystic Ovarian Syndrome,PCOS)疾病诊断标准分成PCOS组和非PCOS(non-PCOS);根据胰岛素抵抗(Insulin Resistence,IR)的诊断标准,将PCOS分成:PCOS+IR组(23例)和PCOS+non-IR组(13例);将非PCOS组分成:非PCOS合并胰岛素抵抗组(简写non-PCOS+IR)(11例)和非PCOS未合并胰岛素抵抗简写(non-PCOS+non-IR组)(22例)。其中设定non-PCOS+non-IR组为对照组。2.研究方法(1)测定扳机日血清25(OH)D水平;检测卵泡颗粒细胞中维生素D代谢通路基因CYP2R1、CYP27B1、CYP24A1、GC和VDR m RNA表达水平。(2)统计方法:计量数据采用(?)±s来表示,QPCRR原始CT值用2~(-ΔΔ)CT法来进行最终的m RNA相对表达量计算。组间数据对比利用单因素方差法(one-way ANOVA)进行分析,组间差异比较采用LSD-T检验。以α=0.05为检验水准。结果1.患者一般临床资料的比较VD缺乏组、不足组及充足组间患者年龄、BMI、不孕年限、AMH比较差异均无统计学意义(P0.05)。2.血清维生素D水平与其代谢通路相关基因表达的比较(1)VD缺乏组CYP2R1和VDR基因m RNA表达量低于充足组,差异有统计学意义(P0.05)。两组间CYP27B1、CYP24A1、GC基因表达比较差异无统计学意义(P0.05)。(2)VD不足组与缺乏组及充足组相比,维生素D代谢通路相关基因表达均无显著性差异(P0.05)。3.PCOS及胰岛素抵抗与维生素D代谢通路相关基因表达的比较(1)PCOS+non-IR组与对照组维生素D代谢通路相关基因表达的比较。两组间CYP2R1、CYP27B1、CYP24A1、GC和VDR m RNA表达无显著性差异(P0.05)。(2)PCOS+non-IR组与PCOS+IR组维生素D代谢通路相关基因表达的比较PCOS+non-IR组CYP2R1高于PCOS+IR组,差异有统计学意义(P0.05)。VDR基因表达PCOS+non-IR组较PCOS+IR组有升高趋势,但差异无统计学意义(P=0.058)。(3)PCOS+IR组与对照组维生素D代谢通路相关基因表达的比较PCOS+IR组CYP2R1和VDR的基因表达量均低于对照组(P0.05),两组间CYP27B1、CYP24A1、GC m RNA表达无显著性差异(P0.05)。(4)non-PCOS+IR组与对照组维生素D代谢通路相关基因表达的比较non-PCOS组CYP2R1的表达量明显低于对照组(P0.05),两组间CYP27B1、CYP24A1、GC、VDR m RNA表达无显著性差异(P0.05)。小结血清维生素D水平与CYP2R1基因表达密切相关,CYP2R1表达的酶是维生素D代谢限速酶。CYP24A1、GC基因为维生素D代谢通路的下游基因,维生素D水平增加不能改变其表达。胰岛素抵抗是影响维生素D代谢通路相关基因表达的关键因素。
【学位单位】：郑州大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R714.8
【部分图文】：

图 2.1 血清和卵泡液维生素 D 水平的散点图表 2.5 三组间助孕结局的比较F P获卵率1.070 .345*2PN 率2.476 .087*优胚率4.721 .010*注：*代表 ANOVA，其中 P＜0.05 表示差异有统计学意义。表 2.6 三组间获卵率、2PN 率和优胚率的比较获卵率 2PN 率 优胚率VD 缺乏组 1.16±0.35 0.57±0.16 0.43±0.24VD 不足组 1.13±0.33 0.64±0.18 0.52±0.26VD 充足组 1.06±0.26 0.60±0.18 0.57±0.24

三组患者间BMI的比较

三组患者间年龄的比较
【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 高松城;李毅;陈艳;温丽萍;;血脂水平与体外受精周期胚胎质量的相关性研究[J];国际检验医学杂志;2017年08期

2 刘国昇;;为什么不要住新装修的房子[J];人人健康;2017年03期

3 K.S.Hackbart;R.M.Ferreira;A.A.Dietsche;M.T.Socha;R.D.Shaver;M.C.Wiltbank;P.M.Fricke;杨帆;李奉仙;罗仕伟;;日粮中补充有机锌、有机锰、有机铜及有机钴对奶牛产奶量、卵泡生长、胚胎质量以及组织中矿物质元素含量的影响(三)[J];饲料与畜牧;2013年07期

4 洪蕾,杨健之;胚胎质量对冷冻结果的影响分析[J];南京医科大学学报;2001年06期

5 徐梓萌;马盼盼;栾维民;马馨;;线粒体与胚胎质量相关性研究进展[J];动物医学进展;2018年11期

6 宋蕊;贾婵维;马延敏;任国庆;王树玉;;卵胞浆内单精子注射时机对胚胎质量的影响[J];中国优生与遗传杂志;2014年10期

7 韩瑞刚;朱亮;;胚胎质量评估研究进展[J];生殖与避孕;2010年12期

8 陆小激;冯云;张爱军;孙贻娟;;以胚胎质量评分预测体外受精-胚胎移植妊娠结局[J];上海医学;2006年03期

9 赵杰;陈秀娟;何江峰;;人类辅助生殖技术中胚胎质量评估方法的研究进展[J];生殖与避孕;2014年01期

10 李真,顾美礼,王智彪,胡凯,艾玲,杜永洪;生长因子作为评价胚胎质量的生物学标记物的研究[J];中国优生与遗传杂志;2002年05期

相关博士学位论文 前1条

1 李嘉恒;维生素D水平与其代谢通路相关基因表达及胚胎质量关系的研究[D];郑州大学;2019年

相关硕士学位论文 前10条

1 荆晓;解冻后胚胎质量对其早期临床妊娠结局的影响[D];山西医科大学;2017年

2 何文;冻胚移植后早期流产相关因素及FISH检测流产组织染色体异常的研究[D];山东大学;2011年

3 国玉蕊;采用偏振光显微镜分析透明带在受精过程中的作用[D];重庆医科大学;2010年

4 崔阳阳;活血消异方对子宫内膜异位症模型小鼠生殖功能及体外受精—胚胎移植妊娠结局的影响[D];北京中医药大学;2014年

5 姜淼;影响试管婴儿辅助助孕妊娠结局的多因素分析[D];大连医科大学;2016年

6 崔静霞;卵巢刺激中雌激素水平与体外受精—胚胎移植结局的相关因素及后续结果分析[D];河北医科大学;2014年

7 吴银玲;小鼠超数排卵后胚胎质量评价[D];河北大学;2016年

8 董悦文;活性氧簇及总抗氧化能力在子宫内膜异位症患者血清、卵泡液及颗粒细胞中的表达[D];河北医科大学;2015年

9 王会霞;BMI对不孕患者IVF/ICSI-ET助孕结局的影响[D];河北医科大学;2015年

10 何于夏;卵巢储备功能评估指标与体外受精—胚胎移植治疗情况的临床研究[D];南方医科大学;2013年

本文编号：2866947