microRNA-126及EGFL7在新辅助化疗局部晚期宫颈癌组织及细胞中的表达和意义

发布时间：2020-11-03 01:58

　　 目的:探讨耐药相关基因miR-126及EGFL7在新辅助化疗后局部晚期宫颈癌组织和顺铂耐药细胞株中的表达和意义,为预测新辅助化疗敏感性提供新的理论依据。方法:选取山西大医院妇产科2012年2月至2018年10月收治的FIGO分期ⅠB_(2、)ⅡA_2期的行铂类为基础的新辅助化疗局部晚期宫颈癌患者35例。入选患者排除化疗禁忌症,放化疗及手术治疗史。所有入选患者均经大医院病理科病理组织证实明确,患者均签署知情同意书,行2—3疗程以铂类为基础的新辅助化疗。2个疗程后对35例患者进行疗效评估,其中25例为临床有效组,10例为临床无效组,收集新辅助化疗后的宫颈组织标本,进行免疫组织化学染色检测临床有效组及无效组组织切片中EGFL7的表达差异。利用在线数据库对EGFL7的基因调控网络进行分析,预测其可能的上游调控分子:microRNA-126。培养铂类耐药细胞株HeLa/DDP及亲代细胞株HeLa,显微镜下观察细胞形态差异,检测两组细胞的顺铂半数抑制浓度(IC50),然后分别进行细胞增殖实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验、细胞凋亡实验检测细胞的增殖、凋亡、侵袭和转移。细胞免疫组织化学和蛋白印迹实验检测两组细胞中EGFL7蛋白的表达。通过qRT-PCR检测两组细胞中miR-126及EGFL7的mRNA表达水平,进行独立样本t检验和person相关性分析。结果:1.新辅助化疗临床无效组化疗后EGFL7的表达与临床有效组相比明显上调(P0.05),EGFL7蛋白在铂类耐药细胞株HeLa/DDP中表达显著高于在亲代HeLa细胞中的表达(P0.05)。2.与HeLa细胞株比较,HeLa/DDP细胞的IC50明显升高(P0.05),转移性增高(P0.05),侵袭性增强(P0.05);一定顺铂浓度作用后HeLa/DDP细胞凋亡率显著低于亲代HeLa细胞(P0.05),无药物干预下其增殖速度低于亲代HeLa细胞。3.qRT-PCR结果表明,与HeLa细胞相比,HeLa/DDP细胞中EGFL7及miR-126的mRNA表达显著升高(P0.05)。4.相关性分析表明,miR-126与EGFL7的mRNA表达具有显著相关性(r=0.992,P0.05)。结论:1.临床化疗无效组组织内EGFL7的表达明显较高,提示与耐药相关。2.EGFL7和miR-126在铂类耐药HeLa/DDP细胞中的表达升高。miR-126与EGFL7在耐药细胞株HeLa/DDP及HeLa细胞株中的表达具有相关性。
【学位单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R737.33
【文章目录】：
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前言
第一部分 EGFL7在行NACT的LACC患者宫颈癌组织中的表达和意义
    1 材料与方法
        1.1 一般资料
        1.2 实验方法
        1.3 统计学处理
    2 结果
    3 讨论
    4 结论
第二部分 在线工具预测与EGFL7相关的microRNA
    1 方法
        1.1 在线数据库预测与EGFL7相关的mircroRNA
    2 结果
        2.1 在线数据库预测与EGFL7相关的microRNA
    3 讨论
    4 结论
第三部分 耐药细胞株Hela/DDP和亲代细胞株HeLa中 microRNA-126及EGFL7 的表达和意义
    1 材料与方法
        1.1 实验细胞
        1.2 实验试剂
        1.3 实验主要设备
        1.4 实验方法
        1.5 统计学方法
    2 结果
    3 讨论
    4 结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢
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本文编号：2867916